實(shí)驗(yàn)操作步驟：
a．采用認(rèn)可的方案處死人皮膚成纖維細(xì)胞,CCC-HSF-1細(xì)胞嚙齒動(dòng)物。   
b．立即在無菌超凈臺(tái)內(nèi)用70％乙醇擦洗整個(gè)動(dòng)物。 
c．用無菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用無菌鑷子將皮膚扯向后腿。   
d．用另一無菌的剪刀和鑷子切開腹部，取出含有胚胎的子宮，置于無菌的培養(yǎng)皿上。   
e．剔除胚胎周圍的包膜，將胚胎放于無菌的含有無菌PBS的100ml燒杯中。   
f．漂洗胚胎，去掉PBS。繼續(xù)用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮為止。

公司向您推薦PrimaCell™人膽道癌組織源細(xì)胞試劑盒規(guī)格的詳細(xì)說明：

細(xì)胞株的培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)：
用于檢測(cè)細(xì)胞因子的細(xì)胞株通常培養(yǎng)于含10％小牛血清和抗生素的培養(yǎng)液中，培養(yǎng)對(duì)細(xì)胞因子有依賴性的細(xì)胞株時(shí)還有加入適量細(xì)胞因子。在37℃ 5％ CO2 的飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)特性，在適當(dāng)?shù)臅r(shí)候進(jìn)行傳代，一般3～4 天傳代一次。
懸浮生長(zhǎng)細(xì)胞的傳代：
直接離心后吸去培養(yǎng)上清液，用新鮮培養(yǎng)液稀釋懸浮細(xì)胞，一般按1：2-1：5 稀釋細(xì)胞后，分瓶繼續(xù)培養(yǎng)。
?
實(shí)驗(yàn)材料：
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶
2. 100ml滅菌燒杯2個(gè)； 人皮膚成纖維細(xì)胞,CCC-HSF-1細(xì)胞
3、50ml離心筒2個(gè)
4、滅菌培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè)
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無菌玻璃攪拌棒1個(gè)
6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊；
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把；
8、酒精燈1臺(tái)；

血清/血漿總膽汁酸酶循環(huán)比色法定量檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

細(xì)菌內(nèi)毒素比色法定量檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

細(xì)菌DNA損傷彗星*熒光檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

擬南芥種子甲磺酸乙脂突變誘導(dǎo)試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：5次

通用型人體鼻病毒（rhinovirus）定量PCR擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

血D－酸比色法定量檢測(cè)試劑盒  進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

冰凍切片組織BAX蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：10/20次

細(xì)菌硫酸氫鉍選擇瓊脂平板 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：50個(gè)

體尿素比色法定量檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

核酸氧化8-氧脫氧鳥苷（8-oxo-dG）ELISA分析試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：48/96次

HCV（HEPATITIS VIRUS C）病毒標(biāo)準(zhǔn)曲線定量PCR擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：2次

S腺苷同型半胱氨酸（SAH或AdoHcy）酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

PrimaCell™人膽道癌組織源細(xì)胞試劑盒規(guī)格3--4,5-二甲異惡唑分子式：112.12982英文名稱：3- 4,5 -二甲異惡唑號(hào)：13999-39-8分子量： C5H8N2O

2,6-二并[1,2-b:4,5-b']二呋分子式：310.35英文名稱：2,6- two phenyl and [1,2-b:4,5-b'] two號(hào)：5379-77-1分子量： C22H14O2

1,2-雙(*硅烷)分子式：222.48英文名稱：1,2- bis (three methyl silicone) benzene號(hào)：17151-09-6分子量： C12H22Si2

1,4-雙(二甲氯甲硅烷)分子式：263.31英文名稱：1,4- bis (two methyl chloride) benzene號(hào)：1078-97-3分子量： C10H16Cl2Si2

高純碳酸鍶分子式：147.63英文名稱：High purity strontium carbonate號(hào)：1633-05-2分子量： SrCO3

萘酮英文名稱：Nalidixic acid分子式：232.24分子量： C12H12N2O3號(hào)：389-08-2

2-氯-4,6-二甲氧嘧分子式：174.58英文名稱：2- -4,6- two a號(hào)：13223-25-1分子量： C6H7ClN2O2

4-戊氧-4'-聯(lián)(5OCB)分子式：265.35英文名稱：4- pentyloxy -4'- cyano biphenyl (5OCB)號(hào)：52364-71-3分子量： C18H19NO

甲氧蟲酰分子式：368.47英文名稱：A methyl oxygen號(hào)：161050-58-4分子量： C22H28N2O3

鈦酸鍶分子式：183.49英文名稱：Strontium titanate號(hào)：12060-59-2分子量： O3SrTi

2,4-二氯-5-甲嘧分子式：163英文名稱：2,4- two -5-號(hào)：1780-31-0分子量： C5H4Cl2N2

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號(hào)11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號(hào)16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。