細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號(hào)11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號(hào)16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。

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細(xì)胞株的培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)：
用于檢測(cè)細(xì)胞因子的細(xì)胞株通常培養(yǎng)于含10％小牛血清和抗生素的培養(yǎng)液中，培養(yǎng)對(duì)細(xì)胞因子有依賴(lài)性的細(xì)胞株時(shí)還有加入適量細(xì)胞因子。在37℃ 5％ CO2 的飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)特性，在適當(dāng)?shù)臅r(shí)候進(jìn)行傳代，一般3～4 天傳代一次。
懸浮生長(zhǎng)細(xì)胞的傳代：
直接離心后吸去培養(yǎng)上清液，用新鮮培養(yǎng)液稀釋?xiě)腋〖?xì)胞，一般按1：2-1：5 稀釋細(xì)胞后，分瓶繼續(xù)培養(yǎng)。
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實(shí)驗(yàn)操作步驟：
a．采用認(rèn)可的方案處死人皮膚成纖維細(xì)胞,CCC-HSF-1細(xì)胞嚙齒動(dòng)物。   
b．立即在無(wú)菌超凈臺(tái)內(nèi)用70％乙醇擦洗整個(gè)動(dòng)物。 
c．用無(wú)菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用無(wú)菌鑷子將皮膚扯向后腿。   
d．用另一無(wú)菌的剪刀和鑷子切開(kāi)腹部，取出含有胚胎的子宮，置于無(wú)菌的培養(yǎng)皿上。   
e．剔除胚胎周?chē)陌?，將胚胎放于無(wú)菌的含有無(wú)菌PBS的100ml燒杯中。   
f．漂洗胚胎，去掉PBS。繼續(xù)用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮為止。
實(shí)驗(yàn)材料：
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶
2. 100ml滅菌燒杯2個(gè)； 人皮膚成纖維細(xì)胞,CCC-HSF-1細(xì)胞
3、50ml離心筒2個(gè)
4、滅菌培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè)
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無(wú)菌玻璃攪拌棒1個(gè)
6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊；
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把；
8、酒精燈1臺(tái)；

核抗原－FITC標(biāo)記法細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：10次

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石蠟切片脂質(zhì)過(guò)氧化物4-羥基壬烯酸（4－HNE）熒光染色試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：10次

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石蠟切片免疫組織化學(xué)AP酶聯(lián)NBT/BCIP直接檢測(cè)試劑盒（含AP一抗） 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：10次

PrimaCell™人皮膚癌組織源細(xì)胞試劑盒規(guī)格順-2,3-聯(lián)-1-丙氮丙分子式：237.34英文名稱(chēng)：CIS -1-, -2,3-, N, N, C, N, C, C, C, n號(hào)：314062-46-9分子量： C17H19N

5,8-二溴-2,3-雙(4-甲氧)喹喔啉分子式：500.19英文名稱(chēng)：Double 5,8- dibromo -2,3- (4- methoxyphenyl) quinoxaline號(hào)：162967-90-0分子量： C22H16Br2N2O2

2,3-二氫并呋分子式：120.15英文名稱(chēng)：2,3- two hydrogen and benzene號(hào)：496-16-2分子量： C8H8O

2-氟-3-硝吡分子式：142.09英文名稱(chēng)：2- -3- nitro pyridine號(hào)：1480-87-1分子量： C5H3FN2O2

丹參酮IIA英文名稱(chēng)：Salvia IIA分子式：294.34442分子量：C19H18O3號(hào)：568-72-9

2-甲-5-乙吡分子式：119.16英文名稱(chēng)：2- methyl -5- vinyl pyridine號(hào)：140-76-1分子量： C8H9N

2,3-雙(羥甲)萘分子式：188.22英文名稱(chēng)：2,3- bis (Qiang Jiaji) naphthalene號(hào)：31554-15-1分子量： C12H12O2

福來(lái)英文名稱(chēng)：Fulaigen分子式：264.19分子量： C10H8N4O5號(hào)：1672-88-4

D(+)-五水棉子糖英文名稱(chēng)：D (+) - raffinose five water分子式：594.51分子量：C18H42O21號(hào)：17629-30-0

2-溴呋分子式：146.97英文名稱(chēng)：2- bromide號(hào)：584-12-3分子量： C4H3BrO

間甲英文名稱(chēng)：Para amino benzoic acid分子式：137.14分子量： C7H7NO2號(hào)：36288