當(dāng)前位置:上海研生實業(yè)有限公司>>細(xì)胞培養(yǎng)>>細(xì)胞培養(yǎng)、鑒定試劑盒>> PrimaCell™大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞試劑盒
PrimaCell™人卵巢成纖維細(xì)胞試劑盒規(guī)格
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點:
1.研究的對象是活細(xì)胞
在實驗過程中,根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況,包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,可以根據(jù)實際需要進(jìn)行人為的控制,同時,可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞,需要時,可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
PrimaCell™大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞試劑盒說明書 | 6次/盒 | YS-X6832 |
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培養(yǎng)操作:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細(xì)胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,細(xì)胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細(xì)胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液,注意凍 存管做好標(biāo)識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取.
細(xì)胞MAPK蛋白表達(dá)熒光定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:10/50 次
糖果環(huán)氨酸(cyclamate)含量高效相色譜法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
血乙醇脫氫酶IV活性比色法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
載玻片細(xì)胞PASE-7蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:10/20次
Cy5標(biāo)記二抗(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠) 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:100微升
血清葡糖酸苷酶(GLUCURONIDASE)活性比色法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
冰凍切片組織PASE-6蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:10/20次
蔬菜乙酸比色法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
組織單胺氧化酶A型(MAO-A)活性熒光定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
石蠟切片組織PASE-5蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:10/20次
細(xì)菌硫酸酶(rhodanase)活性比色法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
體單胺氧化酶(MAO)總活性比色法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
PrimaCell™大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞試劑盒說明書硫酸汞鉀分子式:413.94英文名稱:Potassium mercury號:14099-12-8分子量: C3HgKN3S3
氫氧鍶分子式:265.76英文名稱:Strontium hydroxide號:1311-10-0分子量: Sr(OH)2·8H2O
鉻花R英文名稱:Chromium cyanide R分子式:536.39分子量:C23H15Na3O9S號:3564-18-9
5'-溴間三聯(lián)分子式:309.21英文名稱:5'- three.號:103068-20-8分子量: C18H13Br
8-甲喹啉分子式:143.19英文名稱:8- methyl group號:611-32-5分子量: C10H9N
2--5-溴嘧分子式:174英文名稱:2- amino -5-號:7752-82-1分子量: C4H4BrN3
二氯熒光黃英文名稱:Two chlorine fluorescence yellow分子式:401.2分子量: C20H10Cl2O5號:76-54-0
苦木提取物英文名稱:Quassia extract分子式:分子量:號:
1-金剛烷乙英文名稱:1- diamond分子式:194.27分子量: C12H18O2號:4942-47-6
黃叱精Y英文名稱:Huang Chijing Y分子式:248.71分子量: C12H13ClN4號:532-82-1
2,6-二羥-3,4-二甲吡分子式:139.15英文名稱:2,6- two hydroxy -3,4- two methyl pyridine號:84540-47-6分子量: C7H9NO2
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案:
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實驗方案,必須參閱針對具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基,于2°C至8°C下儲存,直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時,利用傳代時所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用血球計數(shù)器、細(xì)胞計數(shù)儀按照臺盼藍(lán)拒染法或者使用 Countess®自動細(xì)胞計數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度,計算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液,不要攪動細(xì)胞沉淀。
注:離心速度和時間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀,將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時,應(yīng)不時輕輕混合細(xì)胞,使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞,使溫度每分鐘大約降低 1°C?;蛘?,將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中,然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。
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