細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。

公司向您推薦PrimaCell™大鼠腦膜細(xì)胞試劑盒的詳細(xì)說明：

細(xì)胞株的培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)：
用于檢測細(xì)胞因子的細(xì)胞株通常培養(yǎng)于含10％小牛血清和抗生素的培養(yǎng)液中，培養(yǎng)對細(xì)胞因子有依賴性的細(xì)胞株時還有加入適量細(xì)胞因子。在37℃ 5％ CO2 的飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，根據(jù)細(xì)胞生長特性，在適當(dāng)?shù)臅r候進(jìn)行傳代，一般3～4 天傳代一次。
懸浮生長細(xì)胞的傳代：
直接離心后吸去培養(yǎng)上清液，用新鮮培養(yǎng)液稀釋懸浮細(xì)胞，一般按1：2-1：5 稀釋細(xì)胞后，分瓶繼續(xù)培養(yǎng)。
?
實(shí)驗(yàn)操作步驟：
a．采用認(rèn)可的方案處死人皮膚成纖維細(xì)胞,CCC-HSF-1細(xì)胞嚙齒動物。   
b．立即在無菌超凈臺內(nèi)用70％乙醇擦洗整個動物。 
c．用無菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用無菌鑷子將皮膚扯向后腿。   
d．用另一無菌的剪刀和鑷子切開腹部，取出含有胚胎的子宮，置于無菌的培養(yǎng)皿上。   
e．剔除胚胎周圍的包膜，將胚胎放于無菌的含有無菌PBS的100ml燒杯中。   
f．漂洗胚胎，去掉PBS。繼續(xù)用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮為止。
實(shí)驗(yàn)材料：
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶
2. 100ml滅菌燒杯2個； 人皮膚成纖維細(xì)胞,CCC-HSF-1細(xì)胞
3、50ml離心筒2個
4、滅菌培養(yǎng)皿1個，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個
6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊；
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把；
8、酒精燈1臺；

載玻片細(xì)胞組蛋白H3-K4甲基化熒光顯微鏡檢測試劑盒　（針對一甲基） 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：10/20次

通用AP酶聯(lián)檢測封閉溶 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：100毫升

細(xì)胞堿性酶活性比色法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

組蛋白轉(zhuǎn)甲基酶活性檢測試劑盒（H3-K4） 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

 冰凍切片組織PAR-1蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：10/20次

細(xì)胞絡(luò)氨酸酶（TP）活性比色法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

細(xì)胞牛病毒性腹瀉病毒（Bovine Viral Diarrhoea Virus；BVDV）定量PCR擴(kuò)增檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

動物樣品二維電泳裂解 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：用于動物/人體細(xì)胞或組織蛋白二維電泳

 DHPR受體蛋白表達(dá)西方雜交分析試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：5次

小鼠MLH1基因甲基化檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

DNA損傷彗星中性檢測*試劑盒（熒光染色） 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

細(xì)胞ZAP70激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C） 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

PrimaCell™大鼠腦膜細(xì)胞試劑盒燈盞花乙素英文名稱：Flower B分子式：462.37分子量：C21H18O12號：27740-01-8

N-*硅啡啉分子式：159.3英文名稱：N- trimethylsilyl morpholine號：13368-42-8分子量： C7H17NOSi

氘代氫鋰鋁分子式：41.98英文名稱：Lithium aluminium hydride號：14128-54-2分子量： AlD4Li

2-吡分子式：94.12英文名稱：2- amino pyridine號：504-29-0分子量： C5H6N2； NC5H4NH2

1-溴-4,5-二氯-2-硝分子式：英文名稱：1- two -4,5- nitrobenzene號：93361-94-5分子量： C6H2BrCl2NO2

7-氯-4-羥喹啉分子式：179.6英文名稱：7- -4- hydroxy group號：86-99-7分子量： C9H6ClNO

4,5-二氯鄰二甲腈分子式：197.02英文名稱：4,5- two, two號：139152-08-2分子量： C8H2Cl2N2

三尖杉寧堿英文名稱：Three - pointed分子式：831.91分子量：C45H53NO14號：71610-00-9

甲磺雙氫麥角毒堿英文名稱：Dihydroergotoxine methanesulfonate分子式：423.53分子量：C20H29N3O5S號：8067-24-1

硝酸鉀分子式：101.1英文名稱：Potassium nitrate號：7757-79-1分子量： KNO3

炔諾酮英文名稱：Of the分子式：298.42分子量： C20H26O2號：68-22-4