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操作步驟:
1.編號:將樣品對應(yīng)微孔按序編號,每板應(yīng)設(shè)陰性對照 2 孔、陽性對照 2 孔、空白對照 1孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)
2.加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照 50μl。然后在待測樣品孔先 加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測樣品 10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,
3.溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4.配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用。
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此 重復(fù) 5 次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl,空白孔除外。
7.溫育:操作同 3。
8.洗滌:操作同 5。
9.顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10 分鐘.
10.終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
11.測定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應(yīng)在加終止 液后 15 分鐘以內(nèi)進行。
服務(wù):
我們可以根據(jù)您的應(yīng)用需要,比如在檢測范圍、種屬以及靈敏度等方面有特殊要求,而量身定制檢測試劑盒,有效控制檢測試劑成本。并可提供免費代測。
產(chǎn)品名稱 | 兔子補體蛋白4(C4)ELISA檢測試劑盒 |
英文名稱 | Rabbit Complement 4 (C4) ELISA Kit |
貨號 | YS-R9640 |
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試劑配制
1、酶聯(lián)板(Assay plate ):一塊(96孔或者48孔)。
2、標(biāo)準(zhǔn)品(Standard):2瓶(凍干品)。
3、樣品稀釋液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。
4、生物素標(biāo)記抗體稀釋液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。
5、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。
6、生物素標(biāo)記抗體(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)
7、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)
8、底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。
9、濃洗滌液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
樣本實驗前準(zhǔn)備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(2)血漿:
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
(4)細(xì)胞培養(yǎng)上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。
(5)培養(yǎng)細(xì)胞
檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(6)組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗生物素抗體IgG 0.1mlRabbit Anti-Biotin/PE-Cy5.5
PE-Cy3標(biāo)記的兔抗雞IgM 0.1mlRabbit Anti-chicken IgM/PE-Cy3
Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗豚鼠IgG 0.1mlRabbit Anti-Guinea pig IgG/Alexa Fluor 555
Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗人IgM 0.1mlRabbit Anti-human IgM/Alexa Fluor 488
Cy7標(biāo)記的兔抗小鼠IgG 0.1mlRabbit Anti-mouse IgG/Cy7
PE-Cy3標(biāo)記的兔抗豬IgG 0.1mlRabbit Anti-pig IgG/PE-Cy3
Cy3標(biāo)記的驢抗兔IgG 0.1mlDonkey Anti-rabbit IgG/Cy3
囊素三肽/三肽囊素/雞法氏囊三肽 100mgBursin
整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶1型-7抗原 0.5mgADAMTS7 peptide
環(huán)苷酸應(yīng)答元件結(jié)合蛋白(抗原) 0.5mgCREB-1 (cAMP responsive element binding protein-1)
胰島素降解酶(抗原) 0.5mgIDE
相關(guān)死亡促進因子Bad抗原 0.5mgBad (BCL-xL/BCL-2-associated death promoter)
微管相關(guān)蛋白(抗原) 0.5mgTau protein
多配體蛋白聚糖1抗原 0.5mgCD138/Syndecan-1
兔子補體蛋白4(C4)ELISA檢測試劑盒根皮素 60-82-2 規(guī)格: 20mg
氧化石蒜堿 72510-04-4 規(guī)格: 20mg
山麥冬皂苷B 規(guī)格: 20mg
甲基異茜草素-1-甲 7460-43-7 規(guī)格: 5mg
大車前苷 104777-68-6 規(guī)格: 20mg
刺芒柄花素 485-72-3 規(guī)格: 20mg
無水葡萄糖 50-99-7 規(guī)格: 100mg
素 規(guī)格: 20mg
原堿(滴定法95%) 509-20-6 規(guī)格: 20mg
石榴皮鞣素 65995-64-4 規(guī)格: 10mg
7-羥基香 93-35-6 規(guī)格: HPLC≥98%,20mg/vial
煙酰胺 98-92-0 規(guī)格: HPL≥99.5%;50mg/vial
槲皮甙 522-12-3 規(guī)格: HPLC≥98%,20mg/vial
石榴皮鞣素 65995-64-4 規(guī)格: HPLC≥98%,10mg/vial
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