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半邊蓮探針法PCR鑒定試劑盒說明書

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產(chǎn)品型號50次

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廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

所  在  地上海市

更新時間:2020-11-17 10:39:20瀏覽次數(shù):264次

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半邊蓮探針法PCR鑒定試劑盒說明書原理是由一對引物介導(dǎo),能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增,經(jīng)過n個熱循環(huán)擴增,擴增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴增效率=倍,使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。

參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:半邊蓮探針法PCR鑒定試劑盒說明書
英文名稱:Herba lobeliae chinensis       
貨號:YSP8914
產(chǎn)品規(guī)格:50次
產(chǎn)品運輸:低溫運輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
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適用范圍【參考值】
1.試劑盒有效性判定:
(1)陽性對照:有典型S型擴增曲線或Ct值≤35。
(2)陰性對照:Ct值>38或無Ct值,線形為直線或輕微斜線,無指數(shù)增長期。
2.標本結(jié)果判定:
(1)陽性:標本檢測結(jié)果Ct值≤35或有明顯指數(shù)增長期。
(2)可疑:標本檢測結(jié)果Ct值在35~38范圍內(nèi)。此時應(yīng)對標本進行重復(fù)檢測,如重復(fù)實驗結(jié)果Ct值仍在35~38范圍內(nèi),有明顯指數(shù)增長期,則判定為陽性,否則為陰性。
(3)陰性:標本檢測結(jié)果Ct值>38或無Ct值。
  實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
    10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1(10pM)               2μl
      引物2(10PM)              2μ
      Taq酶(2U/μl)            1μl
      DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
      加ddH2O至               50 μl
   視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。好設(shè)立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
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PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學(xué)中小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時完成擴增反應(yīng)。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板。可直接用臨床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術(shù)概論。
碳氮化鈦 powder, 1-2 μm, 99%無菌去離子水(For Cell Culture )  ddH2O造紙殺菌劑anti- CBLN4 antibody

anti- CBP,EIF4E antibody

碳化鎢 粉末,99.9% metals basis, <10μm無菌去離子水(For Cell Culture )  ddH2O十二烷基異酸酯anti- CBP20 antibody

anti- CBPE antibody

碳化鎢 9.8%,3-20nm 超純水milli-Q級   無菌瓶裝  非無菌的四香葉醇anti- CBPN antibody

anti- CBR3 antibody

碳化鎢 粉末,99.9% metals basis, ≤1μm超純水milli-Q級   無菌瓶裝  非無菌的羥基灰石anti- CBR4 antibody

anti- CBS antibody

銩(III),六水 99.99% metals basis超純水milli-Q級   無菌瓶裝  非無菌的液體石蠟anti- CBX1 antibody

anti- CBX2 antibody

氟化銩(III),無水 粉末, 99.99%超純水milli-Q級   無菌瓶裝  非無菌的魚藤酮anti- CBX3 antibody

anti- CBX4 antibody

銩(III) 無水 粉末,99.9% metals basis超純水milli-Q級   無菌瓶裝  非無菌的氨糖(D-葡萄糖鹽酸鹽)anti- CBX5 antibody

anti- CBX6 antibody

溴化銩(III) 無水,粉末, 99.99%1×PBS,pH7.2-7.4,0.01M,細胞培養(yǎng)級    科羅索酸anti- CBY1 antibody

anti- CC2D1A antibody

化銩(III) 無水,粉末, 99.9% metals basis1×PBS,pH7.2-7.4,0.01M,細胞培養(yǎng)級 糯米anti- CC2D1B antibody

anti- CC2D2A antibody

硫酸銩(III),八水 99.9% metals basis10×PBS,細胞培養(yǎng)級BHA基羥基茴香醚anti- CCAR2 antibody

anti- CCBL1 antibody
半邊蓮探針法PCR鑒定試劑盒說明書生精細胞凋亡相關(guān)基因4抗體(R)-(+)-N-芐基-1-苯胺 98%原代骨骼肌細胞培養(yǎng)特制添加劑pUNO3-hTLR09a

惡性腫瘤特異性生長因子抗體(-)-10-樟腦磺酰氯 97%原代骨骼肌細胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基pUNO1-mcs

鼠抗人促狀腺素單克隆抗體(1S)-(+)-樟腦-10-磺酰氯 97%原代骨細胞培養(yǎng)特制添加劑pUNO1ss-mcs

促狀腺素受體抗體(1R,2S)-(+)-2,10-樟腦內(nèi)磺酰胺 97%原代骨細胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基pUNO2-mcs

肺癌腫瘤阻抑基因1抗體(-)-10,2-樟腦磺內(nèi)酰胺 99%原代滑膜皮細胞培養(yǎng)特制添加劑pUNO3-mcs

淋巴細胞生成素-1抗體N-二苯亞基-甘氨酸叔酯 98%原代滑膜皮細胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基pUNO1-hTLR1-GFP

狀腺核轉(zhuǎn)錄因子-1/狀腺特異增強子結(jié)合蛋白抗體N,N'-二-BOC-1H-1-胍基吡唑 98%原代內(nèi)皮細胞培養(yǎng)特制添加劑pUNO1-hTLR2-GFP

狀腺轉(zhuǎn)錄因子-2抗體1, 2-二氯-3-代苯 97%原代內(nèi)皮細胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基pUNO1-hTLR3-GFP

微管蛋白抗體二苯亞基腈 99%原代平滑肌細胞培養(yǎng)特制添加劑pUNO1-hTLR4-GFP

微管蛋白-γ抗體(R)-(-)-2,3-二酸鹽酸鹽 99%原代平滑肌細胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基pUNO1-hTLR5-GFP 

 

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