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當(dāng)前位置:上海研生實(shí)業(yè)有限公司>>PCR試劑盒>>PCR鑒定試劑盒>> 50次半邊蓮探針?lè)≒CR鑒定試劑盒說(shuō)明書(shū)
巴戟天染料法PCR鑒定試劑盒說(shuō)明書(shū) 基因擴(kuò)增儀
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱(chēng):半邊蓮探針?lè)≒CR鑒定試劑盒說(shuō)明書(shū)
英文名稱(chēng):Herba lobeliae chinensis
貨號(hào):YSP8914
產(chǎn)品規(guī)格:50次
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
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適用范圍【參考值】
1.試劑盒有效性判定:
(1)陽(yáng)性對(duì)照:有典型S型擴(kuò)增曲線或Ct值≤35。
(2)陰性對(duì)照:Ct值>38或無(wú)Ct值,線形為直線或輕微斜線,無(wú)指數(shù)增長(zhǎng)期。
2.標(biāo)本結(jié)果判定:
(1)陽(yáng)性:標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果Ct值≤35或有明顯指數(shù)增長(zhǎng)期。
(2)可疑:標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果Ct值在35~38范圍內(nèi)。此時(shí)應(yīng)對(duì)標(biāo)本進(jìn)行重復(fù)檢測(cè),如重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果Ct值仍在35~38范圍內(nèi),有明顯指數(shù)增長(zhǎng)期,則判定為陽(yáng)性,否則為陰性。
(3)陰性:標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果Ct值>38或無(wú)Ct值。
實(shí)驗(yàn)過(guò)程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μ
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)
三、注意事項(xiàng)
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。好設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
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PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過(guò)選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬(wàn)個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞;在病毒的檢測(cè)中,PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中小檢出率為3個(gè)細(xì)菌。
(3) 簡(jiǎn)便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無(wú)放射性污染、易推廣。
(4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板。可直接用臨床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
碳氮化鈦 powder, 1-2 μm, 99%無(wú)菌去離子水(For Cell Culture ) ddH2O造紙殺菌劑anti- CBLN4 antibody
anti- CBP,EIF4E antibody
碳化鎢 粉末,99.9% metals basis, <10μm無(wú)菌去離子水(For Cell Culture ) ddH2O十二烷基異酸酯anti- CBP20 antibody
anti- CBPE antibody
碳化鎢 9.8%,3-20nm 超純水milli-Q級(jí) 無(wú)菌瓶裝 非無(wú)菌的四香葉醇anti- CBPN antibody
anti- CBR3 antibody
碳化鎢 粉末,99.9% metals basis, ≤1μm超純水milli-Q級(jí) 無(wú)菌瓶裝 非無(wú)菌的羥基灰石anti- CBR4 antibody
anti- CBS antibody
銩(III),六水 99.99% metals basis超純水milli-Q級(jí) 無(wú)菌瓶裝 非無(wú)菌的液體石蠟anti- CBX1 antibody
anti- CBX2 antibody
氟化銩(III),無(wú)水 粉末, 99.99%超純水milli-Q級(jí) 無(wú)菌瓶裝 非無(wú)菌的魚(yú)藤酮anti- CBX3 antibody
anti- CBX4 antibody
銩(III) 無(wú)水 粉末,99.9% metals basis超純水milli-Q級(jí) 無(wú)菌瓶裝 非無(wú)菌的氨糖(D-葡萄糖鹽酸鹽)anti- CBX5 antibody
anti- CBX6 antibody
溴化銩(III) 無(wú)水,粉末, 99.99%1×PBS,pH7.2-7.4,0.01M,細(xì)胞培養(yǎng)級(jí) 科羅索酸anti- CBY1 antibody
anti- CC2D1A antibody
化銩(III) 無(wú)水,粉末, 99.9% metals basis1×PBS,pH7.2-7.4,0.01M,細(xì)胞培養(yǎng)級(jí) 糯米anti- CC2D1B antibody
anti- CC2D2A antibody
硫酸銩(III),八水 99.9% metals basis10×PBS,細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)BHA基羥基茴香醚a(bǔ)nti- CCAR2 antibody
anti- CCBL1 antibody
半邊蓮探針?lè)≒CR鑒定試劑盒說(shuō)明書(shū)生精細(xì)胞凋亡相關(guān)基因4抗體(R)-(+)-N-芐基-1-苯胺 98%原代骨骼肌細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑pUNO3-hTLR09a
惡性腫瘤特異性生長(zhǎng)因子抗體(-)-10-樟腦磺酰氯 97%原代骨骼肌細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基pUNO1-mcs
鼠抗人促狀腺素單克隆抗體(1S)-(+)-樟腦-10-磺酰氯 97%原代骨細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑pUNO1ss-mcs
促狀腺素受體抗體(1R,2S)-(+)-2,10-樟腦內(nèi)磺酰胺 97%原代骨細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基pUNO2-mcs
肺癌腫瘤阻抑基因1抗體(-)-10,2-樟腦磺內(nèi)酰胺 99%原代滑膜皮細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑pUNO3-mcs
淋巴細(xì)胞生成素-1抗體N-二苯亞基-甘氨酸叔酯 98%原代滑膜皮細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基pUNO1-hTLR1-GFP
狀腺核轉(zhuǎn)錄因子-1/狀腺特異增強(qiáng)子結(jié)合蛋白抗體N,N'-二-BOC-1H-1-胍基吡唑 98%原代內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑pUNO1-hTLR2-GFP
狀腺轉(zhuǎn)錄因子-2抗體1, 2-二氯-3-代苯 97%原代內(nèi)皮細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基pUNO1-hTLR3-GFP
微管蛋白抗體二苯亞基腈 99%原代平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑pUNO1-hTLR4-GFP
微管蛋白-γ抗體(R)-(-)-2,3-二酸鹽酸鹽 99%原代平滑肌細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基pUNO1-hTLR5-GFP
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