培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案，必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)。
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲(chǔ)存，直至使用。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來(lái)。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用血球計(jì)數(shù)器、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用 Countess®自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無(wú)菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。
注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類(lèi)。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低  1°C?；蛘?，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過(guò)夜。

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細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類(lèi)型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
培養(yǎng)操作：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。      
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類(lèi)；
1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取.

組織脂質(zhì)過(guò)氧化物（MDA）活性TBARS比色法定量檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：50次

全組織茜素紅（ALIZARIN RED S）鈣染色試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：10次

純化大鼠腎上腺髓質(zhì)素（AM）基因重組表達(dá)載體（pGEFP-AM）測(cè)序引物對(duì) 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：2 OD

石蠟切片糖原高希爾（PAS）法染色試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：50次

 冰凍切片組織PASE-9蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：10/20次

細(xì)胞科薩基病毒B（Coxsackievirus B）定性檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：20次

全組織NADH心肌黃酶和琥珀酸脫氫酶（Combined NADH-TR-SDH）雙酶活性染色試劑盒  進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：10次

組織鈣離子濃度比色法定量檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：20次

植物游離吲哚-3-乙酸（IAA）熒光定量檢測(cè)試劑盒（包括萃取） 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：20次

ATP酶法冰凍切片人體肌肉組織分型染色試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：20次

精漿鋅含量比色法定量檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：20次

體HHV6-B（HUMAN HERPESVIRUS 6-B）病毒定量PCR擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：20次

PrimaCell™大鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞試劑盒價(jià)格N-甲分子式：99.17英文名稱(chēng)：N- methyl piperidine號(hào)：626-67-5分子量： C6H13N

對(duì)五聯(lián)分子式：382.51英文名稱(chēng)：To five號(hào)：3073-05-0分子量： C30H22

1-(2,4,6-三異丙磺酰)-1,2,4-三唑分子式：335.46英文名稱(chēng)：1- (2,4,6- three) -1,2,4- three號(hào)：54230-60-3分子量： C17H25N3O2S

2-代甲分子式：218.03英文名稱(chēng)：2- iodide號(hào)：615-37-2分子量： C7H7I

鈷標(biāo)準(zhǔn)溶分子式：58.93英文名稱(chēng)：Cobalt standard solution號(hào)：7440-48-4分子量： Co

紅英文名稱(chēng)：Temptation red分子式：496.42分子量： C18H14N2Na2O8S2號(hào)：25956-17-6

枸櫞氯米芬英文名稱(chēng)：Clomiphene citrate分子式：598.08分子量：C32H36ClNO8號(hào)：50-41-9

間硝甲英文名稱(chēng)：Inter - Nitro toluene分子式：137.14分子量： C7H7NO2號(hào)：36373

對(duì)丁溴分子式：213.11英文名稱(chēng)：For butylbenzene號(hào)：41492-05-1分子量： C10H13Br

3,4-二氟硝分子式：159.09英文名稱(chēng)：3,4- two號(hào)：369-34-6分子量： C6H3F2NO2

并噻唑分子式：135.19英文名稱(chēng)：Benzothiazole號(hào)：95-16-9分子量： C7H5NS