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細胞培養(yǎng)的優(yōu)點:
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中,根據(jù)要求可始終保持細胞活力,并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
PrimaCell™大鼠腎足突細胞試劑盒說明書 | 6次/盒 | YS-X6796 |
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2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,可以根據(jù)實際需要進行人為的控制,同時,可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,需要時,可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
培養(yǎng)操作:
1)復(fù)蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并 檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,細胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞,根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,注意凍 存管做好標(biāo)識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取.
甲苯酚紫(cresyl violet)復(fù)染試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:50次
動物組織P型ATP酶(P type ATPase)活性比色法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
電擊法酵母細胞轉(zhuǎn)化試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
AP-NPP底物顯色試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:10次
動物細胞周期M期同步(SYNCHRONY)處理試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:10次
細菌尿素瓊脂平板 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:50個
FITC標(biāo)記二抗POD轉(zhuǎn)換試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:10次
雙參數(shù)細胞周期G2期流式細胞分析試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:10次
真菌/酵母細胞可溶性總核蛋白制備試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
抗體/蛋白生物素標(biāo)記制備試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:3次
端粒酶活性TRAP實時定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
酵母細胞質(zhì)粒提取試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
PrimaCell™大鼠腎足突細胞試劑盒說明書肌酐英文名稱:Creatinine分子式:113.12分子量: C4H7N3O號:60-27-5
性紅80英文名稱:Acid red 80分子式:468.46分子量: C24H17N2NaO5S號:4478-76-6
4-溴-2,2-二吡分子式:英文名稱:4- -2,2- two號:2365分子量:
木香烴內(nèi)酯英文名稱:Costunolide分子式:232.32分子量:C15H20O2號:553-21-9
蒿本內(nèi)酯英文名稱:Artemisia this分子式:190.24分子量: C12H14O2號:4431-01-0
酸喹啉分子式:165.62英文名稱:Hydrochloric acid號:530-64-3分子量: C9H8ClN
2-氯-4--6,7-二甲氧喹唑啉分子式:239.66英文名稱:2- -4-, -6, 7- two號:23680-84-4分子量: C10H10ClN3O2
弱性紅A英文名稱:Weak acid red A分子式:分子量:號:
堿性紅HDC英文名稱:Alkaline red HDC分子式:分子量:號:
3-(2'-甲)-1H-吡唑分子式:158.1998英文名稱:3- (2'- methyl phenyl) -1H-號:59843-49-1分子量: C10H10N2
異煙分子式:137.15英文名稱:Isoniazid號:54-85-3分子量: C6H7N3O
培養(yǎng)細胞凍存方案:
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案,必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基,于2°C至8°C下儲存,直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時,利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細胞。
3.采用血球計數(shù)器、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用 Countess®自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比。根據(jù)所需活細胞密度,計算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液,不要攪動細胞沉淀。
注:離心速度和時間取決于細胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀,將其調(diào)整至該細胞適合的活細胞密度。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時,應(yīng)不時輕輕混合細胞,使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞,使溫度每分鐘大約降低 1°C?;蛘?,將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中,然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。
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