細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。

公司向您推薦PrimaCell™小鼠皮下脂肪細(xì)胞試劑盒說明書的詳細(xì)說明：

細(xì)胞株的培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)：
用于檢測細(xì)胞因子的細(xì)胞株通常培養(yǎng)于含10％小牛血清和抗生素的培養(yǎng)液中，培養(yǎng)對細(xì)胞因子有依賴性的細(xì)胞株時還有加入適量細(xì)胞因子。在37℃ 5％ CO2 的飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，根據(jù)細(xì)胞生長特性，在適當(dāng)?shù)臅r候進(jìn)行傳代，一般3～4 天傳代一次。
懸浮生長細(xì)胞的傳代：
直接離心后吸去培養(yǎng)上清液，用新鮮培養(yǎng)液稀釋懸浮細(xì)胞，一般按1：2-1：5 稀釋細(xì)胞后，分瓶繼續(xù)培養(yǎng)。
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實驗操作步驟：
a．采用認(rèn)可的方案處死人皮膚成纖維細(xì)胞,CCC-HSF-1細(xì)胞嚙齒動物。   
b．立即在無菌超凈臺內(nèi)用70％乙醇擦洗整個動物。 
c．用無菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用無菌鑷子將皮膚扯向后腿。   
d．用另一無菌的剪刀和鑷子切開腹部，取出含有胚胎的子宮，置于無菌的培養(yǎng)皿上。   
e．剔除胚胎周圍的包膜，將胚胎放于無菌的含有無菌PBS的100ml燒杯中。   
f．漂洗胚胎，去掉PBS。繼續(xù)用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮為止。
實驗材料：
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶
2. 100ml滅菌燒杯2個； 人皮膚成纖維細(xì)胞,CCC-HSF-1細(xì)胞
3、50ml離心筒2個
4、滅菌培養(yǎng)皿1個，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個
6、細(xì)胞計數(shù)板1塊；
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把；
8、酒精燈1臺；

組織腎素（renin）活性熒光定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

通用型HRP－DAB底物顯色試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：10次

 細(xì)胞BAX蛋白表達(dá)熒光定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：10/50 次

酵母乙酰輔酶A膽固醇乙酰轉(zhuǎn)移酶（ACAT）活性熒光定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

裂解Ⅸ 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：真菌/酵母細(xì)胞裂解

N-Ras鳥苷酸酶活性分析試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：6次

一步法平端PCR反應(yīng) 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：50次

同位素核酸蛋白結(jié)合反應(yīng)試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

細(xì)胞內(nèi)核酸氧化8-氧鳥苷（8-oxo-G）流式細(xì)胞分析試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：10次

組織沉默調(diào)節(jié)蛋白1 （SIRT1）活性比色法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

通用封阻緩沖 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：100毫升

多聚賴氨酸載玻片 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：10片

PrimaCell™小鼠皮下脂肪細(xì)胞試劑盒說明書二乙二單丁英文名稱：Diethylene glycol monobutyl ether分子式：162.23分子量： C8H18O3號：112-34-5

2-氟-5-吡分子式：112.11英文名稱：2- -5- amino pyridine號：1827-27-6分子量： C5H5FN2

2-羥乙分子式：76.1英文名稱：2- hydroxyethylhydrazine號：109-84-2分子量： C2H8N2O

2''-O-沒食子酰金絲桃苷英文名稱：2''-O- o-galloylhyperin hyperin分子式：616.48分子量：C28H24O16號：53209-27-1

溴乙錠(EB)分子式：394.32英文名稱：Ethidium bromide (EB)號：1239-45-8分子量： C21H20BrN3

1,8-二氮-9-芴酮(DFO)英文名稱：1,8- two n -9- fluorenone (DFO)分子式：182.18分子量： C11H6N2O號：54078-29-4

十五英文名稱：Fifteen acid分子式：242.4分子量： C15H30O2號：

2-乙酰噻唑分子式：127.16英文名稱：2- acetyl thiazole號：24295-03-2分子量： C5H5NOS

2,2,6,6-四甲氮氧物(TEMPO)分子式：156.25英文名稱：2,2,6,6- four methyl piperidine nitrogen oxides (TEMPO)號：2564-83-2分子量： C9H18NO

2,3,5,6-四溴對二甲分子式：421.75英文名稱：2,3,5,6- four xylene bromine號：23488-38-2分子量： C8H6Br4

1,4-二溴萘分子式：285.96英文名稱：1,4- dibromine naphthalene號：83-53-4分子量： C10H6Br2