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細胞培養(yǎng)的優(yōu)點:
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中,根據要求可始終保持細胞活力,并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態(tài)、結構、生命活動等。
產品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
PrimaCell™小鼠胃平滑肌細胞試劑盒 | 6次/盒 | YS-X6755 |
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2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件,可以根據實際需要進行人為的控制,同時,可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,需要時,可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術:如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備。
培養(yǎng)操作:
1)復蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或將 細胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并 檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,細胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數板計數。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞,根據細胞數量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取.
組織腺苷酸激酶(Adenylate kinase)活性酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測試劑盒 進口/國產 規(guī)格:20次
組蛋白H3-K14乙?;瘷z測試劑盒 進口/國產 規(guī)格:10/20次等
10%CHAPS 進口/國產 規(guī)格:100毫升
血卵磷脂膽固醇乙酰轉移酶(LCAT)活性比色法定量檢測試劑盒 進口/國產 規(guī)格:20次
NEUROG基因甲基化程度定量分析試劑盒盒 進口/國產 規(guī)格:20次
生物素標記封閉溶 進口/國產 規(guī)格:100毫升
細胞二酯酶3(PDE3)活性熒光定量檢測試劑盒 進口/國產 規(guī)格:10次
通用型牛沙眼衣原體(Chlamydia)基因檢測試劑盒 進口/國產 規(guī)格:20次
同位素標記放射活性TCA檢測試劑盒 進口/國產 規(guī)格:20次
樹脂法去內毒素試劑盒 進口/國產 規(guī)格:20次
IL-10(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠) 進口/國產 規(guī)格:100微克
細胞內氧化應激活性氧(ROS)初級綠色熒光測定試劑盒 進口/國產 規(guī)格:100次
PrimaCell™小鼠胃平滑肌細胞試劑盒1,3-二亞并異吲哚啉分子式:195.23英文名稱:1,3- two amino benzene and ISO號:65558-69-2分子量: C12H9N3
赤蘚紅英文名稱:Erythrosine分子式:879.86分子量: C20H6I4Na2O5號:568-63-8
硼試劑英文名稱:Boron reagent分子式:329.35分子量: C21H15NO3號:81-48-1
歐前胡素英文名稱:Imperatorin分子式:270.28分子量:C16H14O4號:482-44-0
顏料黃14英文名稱:Pigment yellow 14分子式:657.55分子量: C34H30Cl2N6O4號:5468-75-7
6-溴喹啉分子式:208.06英文名稱:6- bromide號:5332-25-2分子量: C9H6BrN
?;切廴パ跄懹⑽拿Q:Niu Huangxiong deoxycholic acid分子式:499.7分子量:C26H45NO6S號:14605-22-2
丙環(huán)唑分子式:342.22英文名稱:Propiconazol號:60207-90-1分子量: C15H17Cl2N3O2
2-吡分子式:155.2英文名稱:2- phenyl pyridine號:1008-89-5分子量: C11H9N
4-(2-吡)甲醚分子式:185.23英文名稱:4- (2- pyridine) phenyl ether ether號:5957-90-4分子量: C12H11NO
2-(4-溴)萘分子式:283.17英文名稱:2- (4-) naphthalene號:22082-99-1分子量: C16H11Br
培養(yǎng)細胞凍存方案:
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案,必須參閱針對具體細胞的產品說明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基,于2°C至8°C下儲存,直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時,利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細胞。
3.采用血球計數器、細胞計數儀按照臺盼藍拒染法或者使用 Countess®自動細胞計數儀測定總細胞數和活細胞百分比。根據所需活細胞密度,計算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液,不要攪動細胞沉淀。
注:離心速度和時間取決于細胞種類。
5.用預冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀,將其調整至該細胞適合的活細胞密度。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時,應不時輕輕混合細胞,使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞,使溫度每分鐘大約降低 1°C。或者,將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中,然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。
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