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人葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1(GLUT1)ELISA檢測試劑盒
服務(wù):
我們可以根據(jù)您的應(yīng)用需要,比如在檢測范圍、種屬以及靈敏度等方面有特殊要求,而量身定制檢測試劑盒,有效控制檢測試劑成本。并可提供免費(fèi)代測。
產(chǎn)品名稱 | 人穿孔素/成孔蛋白(PF/PFP)ELISA檢測試劑盒 |
英文名稱 | Human perforin / pore forming protein (PF/PFP) ELISA Kit |
貨號 | YS-H11123 |
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試劑配制
1、酶聯(lián)板(Assay plate ):一塊(96孔或者48孔)。
2、標(biāo)準(zhǔn)品(Standard):2瓶(凍干品)。
3、樣品稀釋液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。
4、生物素標(biāo)記抗體稀釋液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。
5、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。
6、生物素標(biāo)記抗體(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)
7、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)
8、底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。
9、濃洗滌液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(2)血漿:
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
(4)細(xì)胞培養(yǎng)上清:
檢測分泌性的成份時(shí),用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。
(5)培養(yǎng)細(xì)胞
檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(6)組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
Cy5.5標(biāo)記的兔抗猴IgM 0.1mlRabbit Anti-MK IgM/Cy5.5
PE-Cy7標(biāo)記的兔抗大鼠IgM 0.1mlRabbit Anti-rat IgM/PE-Cy7
FITC標(biāo)記的驢抗人IgG 0.3mlDonkey Anti-human IgG/FITC
FITC標(biāo)記蛋白-G 0.5mlProtein G/FITC
間變型淋巴瘤激酶(抗原) 0.5mgALK (Anaplastic Lymphoma Kinase)(CD246Ag)
Muellerian抑制因子抗原 1mgAMH/MIS
膜粘連蛋白 A抗原 0.5mgAnnexin A
活化復(fù)制因子1 0.5mgATF1 (Activating Transcription Factor1)
突觸后密度蛋白95(抗原) 0.5mgPSD-95
活化T細(xì)胞表達(dá)和分泌的調(diào)節(jié)因子抗原 0.5mgCCL5/RANTES(regulated on activation normal T cell expressed and secreted)
毒蕈堿型乙酰膽堿受體M3抗原 0.5mgChRM3 peptide
結(jié)蛋白抗原 0.5mgDes(Desmin)
g-氨基丁酸B1受體(多肽) 0.5mgGABAB1(GABAb Receptor 1)
人類白細(xì)胞抗原E 0.5mgHLA-E
人穿孔素/成孔蛋白(PF/PFP)ELISA檢測試劑盒1瓶 MDA-MB-415細(xì)胞株 MDA-MB-415 低溫運(yùn)輸和保存
1瓶 MDA-MB-435S細(xì)胞株 MDA-MB-435S 低溫運(yùn)輸和保存
1瓶 MDA-MB-435細(xì)胞株 MDA-MB-435 低溫運(yùn)輸和保存
1瓶 MDA-MB-453細(xì)胞株 MDA-MB-453 低溫運(yùn)輸和保存
1瓶 MDA-MB-468細(xì)胞株 MDA-MB-468 低溫運(yùn)輸和保存
1瓶 MDBK (NBL-1)細(xì)胞株 MDBK (NBL-1) 低溫運(yùn)輸和保存
1瓶 MDBK細(xì)胞株 MDBK 低溫運(yùn)輸和保存
1瓶 MDCK superdome細(xì)胞株 MDCK superdome 低溫運(yùn)輸和保存
1瓶 MDCK(NBL-2)細(xì)胞株 MDCK(NBL-2) 低溫運(yùn)輸和保存
1瓶 MDCK細(xì)胞株 MDCK 低溫運(yùn)輸和保存
1瓶 ME(Me)細(xì)胞株 ME(Me) 低溫運(yùn)輸和保存
1瓶 ME-180細(xì)胞株 ME-180 低溫運(yùn)輸和保存
1瓶 MEF細(xì)胞株 MEF 低溫運(yùn)輸和保存
操作步驟:
1.編號:將樣品對應(yīng)微孔按序編號,每板應(yīng)設(shè)陰性對照 2 孔、陽性對照 2 孔、空白對照 1孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)
2.加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照 50μl。然后在待測樣品孔先 加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測樣品 10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,
3.溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4.配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用。
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此 重復(fù) 5 次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl,空白孔除外。
7.溫育:操作同 3。
8.洗滌:操作同 5。
9.顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10 分鐘.
10.終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11.測定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應(yīng)在加終止 液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
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