培養(yǎng)細胞凍存方案：
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案，必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細胞。
3.采用血球計數(shù)器、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用 Countess®自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比。根據(jù)所需活細胞密度，計算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細胞沉淀。
注：離心速度和時間取決于細胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀，將其調(diào)整至該細胞適合的活細胞密度。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應(yīng)不時輕輕混合細胞，使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低  1°C?；蛘?，將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。

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細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞，需要時，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標記等各種儀器設(shè)備。
培養(yǎng)操作：
1）復(fù)蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。      
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取.

 細胞RHO 蛋白表達熒光定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：10/50 次

蘭花Ichihashi培養(yǎng)基 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：500毫升溶/片劑

石蠟切片皮爾斯（PERLS-DAB）非血紅素鐵（三價）強化染色試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：50次

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吸煙者人體肺組織微粒體組分（5毫克/毫升） 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：500微升

細胞馮庫薩（VON KOSSA）鈣染色試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：50次

 載玻片細胞P27蛋白表達NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：10/20次

藥品三氯蔗糖（sucralose）含量高效相色譜法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

細胞b-葡糖苷酸酶活性染色試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：50次

 冰凍切片組織P21蛋白表達NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：10/20次

棗椰樹（date palm）培養(yǎng)基 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：500毫升溶/片劑

細菌a-淀粉酶（a-AMYLASE）活性CNPG3比色法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

PrimaCell™小鼠腎成纖維細胞試劑盒D-甘露糖 含量測定 進口/國產(chǎn) 常溫，避光 規(guī)格: 1mg

甘露聚糖肽 鑒別檢查 進口/國產(chǎn) 常溫，避光 規(guī)格: 1mg

核糖核酸酶A 分子量測定 進口/國產(chǎn) 2-8℃，避光 規(guī)格: 1mg/支

人胰島素 分子量測定 進口/國產(chǎn)  規(guī)格:

胸腺肽α1 分子量測定 進口/國產(chǎn)  規(guī)格:

人生長激素釋放抑制因子 分子量測定 進口/國產(chǎn)  規(guī)格:

?；松L激素 ?；松L激素鑒別 進口/國產(chǎn) -20℃，避光 規(guī)格: 2mg

腺苷鈷 HPLC法含量測定 進口/國產(chǎn) 常溫，避光 規(guī)格: 1mg

前列地爾 HPLC法含量測定 進口/國產(chǎn) -20℃，避光 規(guī)格: 10mg

尿苷 鑒別 進口/國產(chǎn) 常溫，避光 規(guī)格: 10mg

次 HPLC法含量測定 進口/國產(chǎn) 2-8℃，避光 規(guī)格: 20mg

 檢查 進口/國產(chǎn) 2-8℃，避光 規(guī)格: 20mg