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PrimaCell™人子宮成纖維細(xì)胞試劑盒說(shuō)明書
PrimaCell™人卵巢成纖維細(xì)胞試劑盒規(guī)格
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn):
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況,包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制,同時(shí),可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察,這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞,需要時(shí),可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄
采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
PrimaCell™小鼠腹腔巨噬細(xì)胞試劑盒規(guī)格 | 6次/盒 | YS-X6741 |
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培養(yǎng)操作:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過(guò)夜)。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,細(xì)胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細(xì)胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液,注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取.
酵母菌YNB培養(yǎng)基 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:100/500毫升
HARRIS蘇木素復(fù)染試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:50次
BAD蛋白免疫共沉淀分析試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:5次
酵母電擊感受態(tài)細(xì)胞直接轉(zhuǎn)化試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:20次
超敏型HRP-TMB底物顯色試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:10/50次
動(dòng)物細(xì)胞周期S期同步(SYNCHRONY)處理試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:10次
通用型HCV(HEPATITIS VIRUS C)病毒定量PCR擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:20次
通用型HRP復(fù)合物穩(wěn)定/稀釋溶 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:10毫升
雙參數(shù)細(xì)胞周期G0期流式細(xì)胞分析試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:10次
裂解IX:真菌/酵母細(xì)胞裂解 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:50次
透射電鏡(TEM)通用載網(wǎng)組織樣品陰性染色試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:20次
P16基因表達(dá)北方雜交分析試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:5次
PrimaCell™小鼠腹腔巨噬細(xì)胞試劑盒規(guī)格2-(2-羥-3--5-甲)-5-氯并三唑分子式:315.8英文名稱:2- (2- hydroxy -3- -5- methyl phenyl) -5- three號(hào):729335分子量: C17H18ClN3O
1-芐-3-羥分子式:191.27英文名稱:1- benzyl -3- piperidine號(hào):14813-01-5分子量: C12H17NO
2-(對(duì)甲)吡分子式:169.23英文名稱:2- (for toluene based) pyridine號(hào):937735分子量: C12H11N
性媒介深黃GG英文名稱:Acid medium deep yellow GG分子式:366.26分子量: C13H8N2Na2O6S號(hào):6054-99-5
N-CBZ-2-氨甲-分子式:248.32英文名稱:N-CBZ-2- ammonia methyl piperidine號(hào):811842-18-9分子量: C14H20N2O2
2-并咪唑分子式:133.15英文名稱:2- aminobenzimidazole號(hào):934-32-7分子量: C7H7N3
6-溴-2-氯并噻唑分子式:248.53英文名稱:6- -2- - benzothiazole bromide號(hào):80945-86-4分子量: C7H3BrClNS
乙炔對(duì)甲砜分子式:180.22英文名稱:Acetylene based on toluene號(hào):13894-21-8分子量: C9H8O2S
4--6-羥吡唑[3,4-d]嘧分子式:151.13英文名稱:4- amino -6- hydroxy [3,4-d]號(hào):5472-41-3分子量: C5H5N5O
2.4-D丁酯英文名稱:2.4-D butyl ester分子式:277.15分子量: C12H14Cl2O3號(hào):94-80-4
3,4-二甲酚英文名稱:3,4- xylene分子式:122.17分子量: C8H10O號(hào):95-65-8
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案:
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案,必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說(shuō)明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基,于2°C至8°C下儲(chǔ)存,直至使用。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí),利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來(lái)。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用血球計(jì)數(shù)器、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用 Countess®自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度,計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無(wú)菌條件下小心倒掉上清液,不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。
注:離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀,將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí),應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞,使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞,使溫度每分鐘大約降低 1°C。或者,將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中,然后將凍存盒置于-80°C條件下過(guò)夜。
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