實驗操作步驟：
a．采用認(rèn)可的方案處死人皮膚成纖維細(xì)胞,CCC-HSF-1細(xì)胞嚙齒動物。   
b．立即在無菌超凈臺內(nèi)用70％乙醇擦洗整個動物。 
c．用無菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用無菌鑷子將皮膚扯向后腿。   
d．用另一無菌的剪刀和鑷子切開腹部，取出含有胚胎的子宮，置于無菌的培養(yǎng)皿上。   
e．剔除胚胎周圍的包膜，將胚胎放于無菌的含有無菌PBS的100ml燒杯中。   
f．漂洗胚胎，去掉PBS。繼續(xù)用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮為止。

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細(xì)胞株的培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)：
用于檢測細(xì)胞因子的細(xì)胞株通常培養(yǎng)于含10％小牛血清和抗生素的培養(yǎng)液中，培養(yǎng)對細(xì)胞因子有依賴性的細(xì)胞株時還有加入適量細(xì)胞因子。在37℃ 5％ CO2 的飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，根據(jù)細(xì)胞生長特性，在適當(dāng)?shù)臅r候進(jìn)行傳代，一般3～4 天傳代一次。
懸浮生長細(xì)胞的傳代：
直接離心后吸去培養(yǎng)上清液，用新鮮培養(yǎng)液稀釋懸浮細(xì)胞，一般按1：2-1：5 稀釋細(xì)胞后，分瓶繼續(xù)培養(yǎng)。
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實驗材料：
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶
2. 100ml滅菌燒杯2個； 人皮膚成纖維細(xì)胞,CCC-HSF-1細(xì)胞
3、50ml離心筒2個
4、滅菌培養(yǎng)皿1個，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個
6、細(xì)胞計數(shù)板1塊；
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把；
8、酒精燈1臺；

JM109電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)菌 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：5 X 100微升

細(xì)胞氧化型谷胱甘肽（GSSG）濃度比色法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：50次

全組織衰老特異性早期脂褐素油性紅原位染色試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：10次

BJ5183細(xì)菌 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：1毫升

*AP酶聯(lián)檢測封閉溶 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：10毫升

動物組織羥脯氨酸（hydroxyproline）比色法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

細(xì)菌鈣轉(zhuǎn)試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

細(xì)胞NADPH氧化酶活性化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次（10樣本）

 通用型組織/細(xì)胞衰老特異性β-半糖苷酶原位染色試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：10/100次

正常大鼠（Sprague Dawley）肝組織微粒體組分（5 毫克/毫升） 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：500微升

活體細(xì)胞半胱氨酸蛋白酶（PASE）總活性原位熒光染色檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

細(xì)胞二酯酶1（PDE1）活性熒光定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：10次

PrimaCell™小鼠小腦顆粒細(xì)胞試劑盒價格性52英文名稱：Acid black 52分子式：1488.13分子量： C60H36Cr2N9Na3O21S3號：5610-64-0

4--1-甲分子式：114.19英文名稱：4- amino -1- methyl piperidine號：41838-46-4分子量： C6H14N2

安塞蜜分子式：201.24英文名稱：An Saimi號：55589-62-3分子量： C4H4KNO4S

(INT)硝四唑紫英文名稱：(INT) four分子式：505.71分子量： C19H13N5O2ICl號：146-68-9

5-溴-2-乙酰吡分子式：200.03英文名稱：5- -2- acetyl pyridine號：214701-49-2分子量： C7H6BrNO

二并[g,p]稠二萘分子式：328.41英文名稱：Two benzene and [g, p] fused two naphthalene號：191-68-4分子量： C26H16

紅四氮唑分子式：334.8英文名稱：Red tetrazoline號：298-96-4分子量： C19H15ClN4

1,1-羰二(2-甲咪唑)分子式：190.2英文名稱：1,1- carbonyl two (2-)號：13551-83-2分子量： C9H10N4O

(R)-(-)-DBD-APy分子式：311.36英文名稱：（R）-（-）- DBD治療號：143112-49-6分子量： C12H17N5O3S

1,4-二[2-(4-甲-5-惡唑)]分子式：392.45英文名稱：1,4- two [2- (4- methyl -5- phenyl oxazole)] benzene號：3073-87-8分子量： C26H20N2O2

3,3'-二氟聯(lián)分子式：190.19英文名稱：3,3'- two f號：396-64-5分子量： C12H8F2

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。