培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實驗方案，必須參閱針對具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用血球計數(shù)器、細(xì)胞計數(shù)儀按照臺盼藍(lán)拒染法或者使用 Countess®自動細(xì)胞計數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細(xì)胞沉淀。
注：離心速度和時間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應(yīng)不時輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低  1°C。或者，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點：

1.研究的對象是活細(xì)胞
在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
培養(yǎng)操作：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。      
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取.

pZERO＋目的基因 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：克隆基因

通用型牛布氏桿菌（Brucella abortus）基因檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

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線蟲同步化生長培養(yǎng)試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：10次

通用型精氨酸（arginine）含量高效相色譜法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

通用型細(xì)胞周期流式細(xì)胞分析試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：100次

PH0-2顯色（BRILLIANT GREEN）指示溶  進口/國產(chǎn) 規(guī)格：50毫升

TEM電鏡石蠟切片免疫組織化學(xué)HRP酶聯(lián)DAB基礎(chǔ)檢測試劑盒（無一抗和二抗） 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：50次

 細(xì)胞CDK4蛋白表達(dá)熒光定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：10/50 次

PrimaCell™小鼠神經(jīng)元細(xì)胞試劑盒6-氯-7-硝喹喔啉分子式：209.59英文名稱：6- chloro -7- nitro quinoxaline號：109541-21-1分子量： C8H4ClN3O2

1,3,5-*吡唑分子式：110.16英文名稱：1,3,5- three methyl號：1072-91-9分子量： C6H10N2

1-氯異喹啉分子式：163.6英文名稱：1- chloride號：19493-44-8分子量： C9H6ClN

酞菁鐵(II)英文名稱：Iron phthalocyanine (II)分子式：568.38分子量： C32H16FeN8號：132-16-1

5-溴-4-氯-3-吲哚磷鈉(BCIP-2Na)英文名稱：5- -4- -3- (BCIP-2Na)分子式：370.43分子量： C8H4BrClNNa2O4P號：102185-33-1

二氫辣椒素英文名稱：Two hydrogen capsaicin分子式：307.43分子量：C18H29NO3號：19408-84-5

醉椒素英文名稱：Drunk pepper分子式：230.25916分子量：C14H14O3號：3155-48-4

2,4-二甲惡唑分子式：97.12英文名稱：2,4-二甲惡唑號：1938830分子量： C5H7NO

1-(4-)咪唑分子式：159.19英文名稱：1- (4- amino phenyl)號：2221-00-3分子量： C9H9N3

4-溴-1-氟-2-硝分子式：219.99英文名稱：4- -1- -2-號：364-73-8分子量： C6H3BrFNO2

2,2'-二甲-4,4'-二聯(lián)分子式：英文名稱：2,2'- two -4,4'- two號：8552分子量：