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產(chǎn)地 | 國產(chǎn) | 加工定制 | 是 |
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適用領(lǐng)域 | 科研 |
PCR的反應(yīng)條件:
因擴(kuò)增片段的大小、反應(yīng)體積、使用擴(kuò)增儀器的不同而不同。
◇ 循環(huán)次數(shù)
根據(jù)模板DNA的量以及擴(kuò)增片段的大小,設(shè)定25~30個循環(huán)。
如果循環(huán)次數(shù)太少,擴(kuò)增量不足;如果循環(huán)次數(shù)太多,則會出現(xiàn)Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45~68℃之間 (預(yù)備實驗可2℃間隔進(jìn)行)。另外,由于在60~68℃間,也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內(nèi)設(shè)定Anneal-Extension溫度, 進(jìn)行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時,每kbp大體可設(shè)定30秒~1分鐘;當(dāng)溫度設(shè)定在68℃以下時, 時間設(shè)定可稍長一些。通常,Anneal溫度太高,有時會得不到擴(kuò)增產(chǎn)物;Anneal溫度太低時,容易發(fā)生非特異性反應(yīng)。另外,Extension時間太短時,會得不到擴(kuò)增產(chǎn)物或者會有一些短的非特異性產(chǎn)物優(yōu)成;而Extension時間太長時,會出現(xiàn)Smear。
儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
產(chǎn)品名稱 | 淡竹葉LAMP鑒定試劑盒規(guī)格 |
英文名稱 | Herba lophatheri |
貨號 | YSP9225 |
實驗注意事項:
1)RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實驗前請充分溝通確認(rèn)實驗方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程,Z后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴(kuò)增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量(包括定量和相對定量)和定性分析。
主要服務(wù):DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù):引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR ?
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線(以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標(biāo)記 6 個離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭,從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭,從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中,重復(fù)上面的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進(jìn)行定量 PCR(見下步),每個樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對數(shù)值為橫軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
TAA(Human tumor-associated antigen) ELISA Kit 人腫瘤相關(guān)抗原6-羧基熒光素琥珀酰亞胺酯 90%地塞米松磷酸鈉 98%anti- RNASEH1 antibody
anti- RNASEH2A antibody
TA(Human anti-teichoic acid antibody) ELISA Kit 人抗磷壁酸抗體5- 羧基熒光素二酸酯 95%四氯化硅 AR,99.50%anti- RNASEH2B antibody
anti- RNASEH2C antibody
T4(Mouse thyroxine) ELISA Kit 小鼠狀腺素異硫氰酸熒光素(異構(gòu)體I) 90%四氯化硅 99.9999%anti- RNASEL antibody
anti- RND2 antibody
T4 ELISA Kit 大鼠狀腺素異硫氰酸熒光素 96%四氯化硅 99.999999%anti- RND3 antibody
anti- RND3 antibody
T4 狀腺素(T4)二酸熒光素 97%四氯化硅 99.9999999%anti- RNF10 antibody
anti- RNF112 antibody
T3(Mouse Tri-iodothyronine)ELISA Kit 小鼠三狀腺原氨酸3-苯 99%氰化亞銅 CPanti- RNF125 antibody
anti- RNF133 antibody
T3 ELISA Kit 大鼠三狀腺原氨酸3-苯酸 98%胞苷-5'-單磷酸二鈉鹽 99%anti- RNF135 antibody
anti- RNF150 antibody
T3 三狀腺原氨酸(T3)4-苯胺 98%間基苯酰氯 99%anti- RNF151 antibody
anti- RNF156 antibody
T.gondii(Human Toxoplasma Gondii ELISA Kit 人剛地弓形蟲二硫化四基秋蘭姆 97%2’-脫氧鳥苷 99%anti- RNF167 antibody
anti- RNF168 antibody
T(Mouse Testoterone)ELISA Kit 小鼠睪酮雄烯二酮 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99%2-脫氧-D-核糖 98%anti- RNF17 antibody
anti- RNF170 antibody
淡竹葉LAMP鑒定試劑盒規(guī)格上皮細(xì)胞培養(yǎng)基(EGFR)ELISA Kit 大鼠表皮生長因子受體膜聯(lián)蛋白Ⅴ檢測試劑盒
動物上皮細(xì)胞培養(yǎng)基(DC-SIGN/CD209)ELISA Kit 大鼠樹突狀細(xì)胞表面特異性C型凝集素-細(xì)胞間黏附分子3結(jié)合非整合素分子膜聯(lián)蛋白Ⅴ檢測試劑盒
腎系膜細(xì)胞培養(yǎng)基(CTX- I )ELISA Kit 大鼠Ⅰ型膠原C端肽膜聯(lián)蛋白Ⅳ檢測試劑盒
成骨細(xì)胞培養(yǎng)基(BAX)Rat Bcl-2 associated X protein,Bax ELISA Kit 大鼠Bcl-2相關(guān)X蛋白膜聯(lián)蛋白Ⅲ檢測試劑盒
軟骨細(xì)胞培養(yǎng)基(ADAM9)ELISA Kit 大鼠解整合素樣金屬蛋白酶9膜聯(lián)蛋白Ⅱ檢測試劑盒
滑膜細(xì)胞培養(yǎng)基 型肝炎二對半全套(立可讀)膜聯(lián)蛋白Ⅰ檢測試劑盒
髓核細(xì)胞培養(yǎng)基 型肝炎二對半全套膜結(jié)合型IgM檢測試劑盒
肝細(xì)胞培養(yǎng)基 破傷風(fēng)抗體(雙抗原夾心法)膜攻擊復(fù)合物檢測試劑盒
星形細(xì)胞培養(yǎng)基 抗抗體 IgM(間接法二步法)膜輔蛋白檢測試劑盒
心肌細(xì)胞培養(yǎng)基 抗抗體 IgG(間接法二步法) 繆勒管抑制物質(zhì)/抗繆勒管激素檢測試劑盒
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