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ATCC細(xì)胞周期指細(xì)胞一個(gè)世代所經(jīng)歷的時(shí)間。從一次細(xì)胞分裂結(jié)束到下一次分裂結(jié)束為一個(gè)周期。細(xì)胞周期反應(yīng)了細(xì)胞增殖速度。
單個(gè)細(xì)胞的周期測(cè)定可采用縮時(shí)攝影的方法,但它不能代表細(xì)胞群體的周期,故現(xiàn)多采用其他方法測(cè)群體周期。
測(cè)定細(xì)胞周期的方法很多,有同位素標(biāo)記法、細(xì)胞計(jì)數(shù)法等,這里介紹一種利用BrdU滲入測(cè)定細(xì)胞周期的方法。
BrdU(5-溴脫氧尿嘧啶核苷)加入培養(yǎng)基后,可做為細(xì)胞DNA復(fù)制的原料,經(jīng)過(guò)兩個(gè)細(xì)胞周期后,細(xì)胞中兩條單鏈均含BrdU的DNA將占l/2,反映在染色體上應(yīng)表現(xiàn)為一條單體淺染。如經(jīng)歷了三個(gè)周期,則染色體中約一半為兩條單體均淺染,另一半為一深一淺。細(xì)胞如果僅經(jīng)歷了一個(gè)周期,則兩條單體均深染。計(jì)分裂相中各期比例,就可算出細(xì)胞周期的值。
1、細(xì)胞生長(zhǎng)至指數(shù)期時(shí),向培養(yǎng)液中加入BrdU,使Z終濃度為10μg/ml。
2、44小時(shí)加秋水仙素,使每ml中含0.1μg。
3、48小時(shí)后常規(guī)消化細(xì)胞至離心管中,注意培養(yǎng)上清的漂浮細(xì)胞也要收集到離心管中。
4、常規(guī)染色體制片(見(jiàn)第三部分:染色體技術(shù))。
5、染色體玻片置56℃水浴鍋蓋上,鋪上2×SSC 液,距紫外燈管6cm處紫外照射30分鐘。
6、棄去2×SSC液,流水沖洗。
7、Giemsa液染色10分鐘,流水沖洗,晾干。
8、鏡檢100個(gè)分裂相,計(jì)*、二、三、四細(xì)胞期分裂指數(shù)。
9、計(jì)算:ATCC細(xì)胞周期(Tc)=48/(小時(shí))
附:(1)BrdU配制: BrdU 10mg十雙蒸水10ml 4℃下避光保存。
(2)2×SSC配制: NaCl 1.75克,檸檬酸三鈉•2H2O 0.88克,加水至100ml,4℃保存
500mg Pramoxine Hydrochloride 637-58-1 鹽酸普莫卡因標(biāo)準(zhǔn)品
500mg Powdered Red Clover Extract 紅車軸提取物粉標(biāo)準(zhǔn)品
500mg Powdered Ginger 生姜粉標(biāo)準(zhǔn)品
500mg Powdered Forskohlii Extract 弗司可林粉末提取物標(biāo)準(zhǔn)品
500mg Powdered Bilberry Extract 越橘提取物標(biāo)準(zhǔn)品
500mg Powdered Andrographis Extract 90244-84-1 穿心蓮提取物標(biāo)準(zhǔn)品
500mg Potassium Guaiacolsulfonate 78247-49-1 愈創(chuàng)木酚磺酸鉀標(biāo)準(zhǔn)品
500mg Potassium Acetate (AS) 127-08-2 醋酸鉀標(biāo)準(zhǔn)品
500mg Polyoxyl Oleate 9004-96-0 油酸聚烴氧酯標(biāo)準(zhǔn)品
ATCC細(xì)胞
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