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初級(jí)會(huì)員 | 第10年

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干細(xì)胞表面受體配體結(jié)合檢測(cè)的新技術(shù)

時(shí)間:2018-3-21閱讀:428
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Tag-lite是SNAP-Tag與HTRF技術(shù)相結(jié)合,用來進(jìn)行干細(xì)胞表面受體分析的一種技術(shù)。
    SNAP和CLIP是小的融合標(biāo)簽蛋白,可特異地與底物通過芐甲基不可逆共價(jià)結(jié)合, 其底物分別為芐甲基鳥嘌呤(BG)和芐甲基胞嘧啶(BC)。由于底物可與各種染料形成衍生物,這樣,通過共價(jià)反應(yīng),染料就標(biāo)記到SANP或CLIP上了。
    SNAP或CLIP可以非常容易地融合到蛋白質(zhì)的N端或C端,所以我們可以構(gòu)建SNAP或CLIP與目標(biāo)蛋白的表達(dá)載體。質(zhì)粒轉(zhuǎn)染、融合蛋白表達(dá)后,加入標(biāo)記了熒光染料的底物,我們可以得到標(biāo)記了熒光染料的目標(biāo)蛋白。
    在Tag-lite技術(shù)中,用pSNAP或pCLIP與編碼目標(biāo)GPCR的基因構(gòu)建質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染入細(xì)胞后,就可表達(dá)N端融合了SNAP或CLIP的目標(biāo)GPCR。
    底物(BG或BC)與HTRF熒光染料反應(yīng)形成衍生物,例如與供體(Donor)鋱穴狀化合物(Lumi4®-Tb)形成衍生物,SANP-GPCR或CLIP-GPCR融合蛋白與其反應(yīng),則Tb被標(biāo)記到GPCR上。加入受體(Acceptor)熒光染料標(biāo)記的配體,可以進(jìn)行受體配體結(jié)合實(shí)驗(yàn)。根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康?,HTRF的能量受體(Acceptor)與底物形成衍生物,則Acceptor被標(biāo)記到GPCR上,干細(xì)胞可以進(jìn)行GPCR同源二聚化實(shí)驗(yàn)。除此之外,我們還可以進(jìn)行GPCR異源二聚化實(shí)驗(yàn)、寡聚化實(shí)驗(yàn)以及內(nèi)源化實(shí)驗(yàn)等細(xì)胞表面受體分析。
鑒別    含量:    進(jìn)口/國產(chǎn)    棉酚    20mg/支    英文名稱    111517-200001    規(guī)格:
UV法含量測(cè)定    含量:    進(jìn)口/國產(chǎn)    雪膽素甲    20mg/支    英文名稱    111518-200602    規(guī)格:
含量測(cè)定    含量:    進(jìn)口/國產(chǎn)    木犀草素    20mg/支    英文名稱    111520-200504    規(guī)格:
含量測(cè)定    含量:    進(jìn)口/國產(chǎn)    金絲桃苷    20mg/支    英文名稱    111521-201004    規(guī)格:
含量測(cè)定    含量:    進(jìn)口/國產(chǎn)    升麻苷    20mg/支    英文名稱    111522-201008    規(guī)格:
含量測(cè)定    含量:    進(jìn)口/國產(chǎn)    5-O-甲基維斯阿米醇苷    20mg/支    英文名稱    111523-200405    規(guī)格:
含量測(cè)定    含量:    進(jìn)口/國產(chǎn)    木香烴內(nèi)酯    20mg/支    英文名稱    111524-201006    規(guī)格:
含量測(cè)定    含量:    進(jìn)口/國產(chǎn)    去氫木香內(nèi)酯    20mg/支    英文名稱    111525-200706    規(guī)格:
干細(xì)胞

 

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