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初級(jí)會(huì)員 | 第10年

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原代細(xì)胞培養(yǎng)生存期的三個(gè)階段

時(shí)間:2017-11-3閱讀:82
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1. 原代細(xì)胞潛伏期(latent phase) :

接種 經(jīng)過(guò) 懸浮期(細(xì)胞質(zhì)回縮,胞體呈圓球形) 貼壁。

初代培養(yǎng)細(xì)胞 經(jīng)過(guò) 10~24小時(shí)或更多時(shí)間。

連續(xù)細(xì)胞系和癌細(xì)胞系 經(jīng)過(guò) 10~30分鐘 貼附。

貼附現(xiàn)象是一個(gè)非常復(fù)雜和受多種因素的影響。

影響細(xì)胞貼附:底物表面不干凈,影響細(xì)胞貼附。

利于細(xì)胞貼附:底物表面帶有陽(yáng)性物質(zhì)與特殊物質(zhì):

纖粘連蛋白(fibronectin FN)、

細(xì)胞表面蛋白(cell surface proteinCSP)
這些物質(zhì)有的存在與細(xì)胞表面,有的來(lái)自血清。

潛伏期特點(diǎn):

長(zhǎng)短與細(xì)胞接種密度、種類、使用的培養(yǎng)基性質(zhì)有關(guān)。

(1)細(xì)胞貼附后進(jìn)入潛伏期,細(xì)胞無(wú)增殖。少見分裂相,細(xì)胞有運(yùn)動(dòng)活動(dòng)。

(2)初代培養(yǎng) 細(xì)胞潛伏期約為24~96小時(shí)或更長(zhǎng),

連續(xù)細(xì)胞系和腫瘤細(xì)胞潛伏期約6~24小時(shí)。

(3)細(xì)胞接種密度大潛伏期短。

(4)細(xì)胞出現(xiàn)分裂相增多時(shí),標(biāo)志細(xì)胞進(jìn)入指數(shù)增生期。

2.指數(shù)增生期(logarithmic growth phase):

特點(diǎn):細(xì)胞增殖Z旺盛階段,分裂相增多。

細(xì)胞分裂指數(shù)(mitotie index MI) :

表示每1000個(gè)細(xì)胞中的分裂相數(shù)。

條件:分裂相數(shù)與細(xì)胞種類、培養(yǎng)成分、pH培養(yǎng)箱溫度有關(guān)。

細(xì)胞分裂指數(shù):

初代細(xì)胞:在0.1%~0.5%之間% ,

連續(xù)分裂細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞:3 ~5% 

指數(shù)增生期是作為細(xì)胞一代活力的時(shí)期,是進(jìn)行實(shí)驗(yàn)和Z主要的階段。 

指數(shù)增生期持續(xù)3~5天,細(xì)胞數(shù)量增多后生長(zhǎng)空間變小,細(xì)胞相互接觸可連接成片。 

正常細(xì)胞:細(xì)胞相互接觸能抑制細(xì)胞運(yùn)動(dòng),這種現(xiàn)象稱為接觸抑制(contact inhibition)。 

腫瘤細(xì)胞:沒(méi)有這種現(xiàn)象,可作為區(qū)別正常與腫瘤細(xì)胞的標(biāo)志之一。當(dāng)腫瘤細(xì)胞達(dá)到一定密度后向三維空間發(fā)展,使細(xì)胞發(fā)生堆積(piled up)。 

由于細(xì)胞不斷增殖分裂,細(xì)胞數(shù)量持續(xù)增多,培養(yǎng)液的營(yíng)養(yǎng)成分減少,代謝產(chǎn)物增多,細(xì)胞受營(yíng)養(yǎng)的枯竭和代謝物的影響,則發(fā)生密度抑制(Density inhibition),導(dǎo)致細(xì)胞分裂停止。 

3.停滯期(stagnate phase) 

細(xì)胞量和密度達(dá)到飽和,細(xì)胞停滯增殖。表明細(xì)胞進(jìn)入到停滯期,細(xì)胞數(shù)量持平,也稱為平頂期(plateau)。 

特點(diǎn):原代細(xì)胞不增殖,有代謝活動(dòng)。培養(yǎng)液中的營(yíng)養(yǎng)已逐漸耗盡,代謝產(chǎn)物積累增多,pH降低,此時(shí)需要傳代,否則細(xì)胞將會(huì)中毒,發(fā)生形態(tài)改變,細(xì)胞會(huì)從底物脫落死亡。 

注意: 

傳代過(guò)晚將影響下一代細(xì)胞的生長(zhǎng),至少要再傳 1~2代 ,通過(guò)換液淘汰死細(xì)胞和受損較輕的細(xì)胞。待細(xì)胞全部恢復(fù)后再用。
*        100克    氣單胞菌鑒別瓊脂
*        100克    血瓊脂基礎(chǔ)2號(hào)
*        1公斤    液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基
*        100克    卵黃高鹽瓊脂基礎(chǔ)
*    RT    25克    胰膘肉湯基礎(chǔ)
*        25公斤    0.5%純度葡萄糖肉湯培養(yǎng)基
*        40克    固體改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基
*        500毫升    聚山梨酯80培養(yǎng)基(真菌)
*    RT    100克    改良沙氏瓊脂培養(yǎng)基
原代細(xì)胞

 

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