細(xì)胞系檢測(cè)方法主要包括以下幾種：

1.光學(xué)顯微鏡和倒置顯微鏡

(1)未染色細(xì)胞：凋亡細(xì)胞的體積變小、變形，細(xì)胞膜完整但出現(xiàn)發(fā)泡現(xiàn)象，細(xì)胞凋亡晚期可見凋亡小體。貼壁細(xì)胞出現(xiàn)皺縮、變圓、脫落。

(2)染色細(xì)胞：常用吉姆薩染色、瑞氏染色等。凋亡細(xì)胞的染色質(zhì)濃縮、邊緣化，核膜裂解、染色質(zhì)分割成塊狀和凋亡小體等典型的凋亡形態(tài)。

2.熒光顯微鏡和共聚焦激光掃描顯微鏡

一般以細(xì)胞核染色質(zhì)的形態(tài)學(xué)改變?yōu)橹笜?biāo)來評(píng)判細(xì)胞凋亡的進(jìn)展情況。常用的DNA特異性染料有：HO33342(Hoechst 33342)，HO33258(Hoechst 33258)和DAPI。這些染料與DNA的結(jié)合是非嵌入式的，主要結(jié)合在DNA的A-T堿基區(qū)。紫外光激發(fā)時(shí)發(fā)射明亮的藍(lán)色熒光。Hoechst是與DNA特異結(jié)合的活性染料，儲(chǔ)存液用蒸餾水配成1mg／ml的濃度，使用時(shí)用PBS稀釋成終濃度為2～5mg／ml。DAPI為半通透性，儲(chǔ)存液用蒸餾水配成1mg／ml的濃度，使用終濃度一般為0. 5～1mg／ml。

Hoechest 33258是膜透性的，因此在活細(xì)胞時(shí)候能輕松進(jìn)入；DAPI是半透性的，有選擇性地進(jìn)入細(xì)胞。因此Hoechest 33258一般用來染活細(xì)胞，可以直接進(jìn)入細(xì)胞；DAPI一般是染固定細(xì)胞。兩者都可以用紫外線看，參見以下的激發(fā)發(fā)射波長(zhǎng)：Hoechst 33258的Z大激發(fā)波長(zhǎng)為346nm，Z大發(fā)射波長(zhǎng)為460nm；Hoechst 33258和雙鏈DNA結(jié)合后，Z大激發(fā)波長(zhǎng)為352nm，Z大發(fā)射波長(zhǎng)為461nm。DAPI的Z大激發(fā)波長(zhǎng)為340nm，Z大發(fā)射波長(zhǎng)為488nm；DAPI和雙鏈DNA結(jié)合后，Z大激發(fā)波長(zhǎng)為364nm，Z大發(fā)射波長(zhǎng)為454nm。

吖啶橙是Z經(jīng)典的靈敏的熒光染料，它可通過與DNA和RNA的連接堿基對(duì)和磷酸鹽基團(tuán)結(jié)合，使細(xì)胞中的DNA和RNA同時(shí)染色而顯示不同顏色的熒光。吖啶橙在稀溶液中呈綠色；在濃溶液中，由于出現(xiàn)二聚體和多聚體而呈現(xiàn)橙紅色。由于DNA是高度聚合物，吸收熒光物質(zhì)的位置較少，故發(fā)綠色熒光：而RNA聚合度低，能和熒光物質(zhì)結(jié)合的位置多，故發(fā)紅色熒光。在熒光顯微鏡下，細(xì)胞核DNA為黃綠色均勻熒光，細(xì)胞質(zhì)和核仁的RNA為橘黃或橘紅色熒光。出現(xiàn)細(xì)胞凋亡時(shí)，細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)內(nèi)可見致密濃染的黃綠色染色，或核染色呈新月形聚集于核膜一邊；晚期可見黃綠色圓形小體，即凋亡小體。細(xì)胞壞死時(shí)，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)黃綠色或橘黃色熒光均可減弱或消失。

結(jié)果評(píng)判：細(xì)胞凋亡過程中細(xì)胞核染色質(zhì)的形態(tài)學(xué)改變分為三期：Ⅰ期的細(xì)胞核呈波紋狀或呈折縫樣，部分染色質(zhì)出現(xiàn)濃縮狀態(tài)；aⅡ期細(xì)胞核的染色質(zhì)高度凝聚、邊緣化；bⅡ期的細(xì)胞核裂解為碎塊，產(chǎn)生凋亡小體。

3.透射電子顯微鏡觀察

凋亡細(xì)胞體積變小，細(xì)胞質(zhì)濃縮。凋亡Ⅰ期的細(xì)胞系核內(nèi)染色質(zhì)高度盤繞，出現(xiàn)許多稱為氣穴現(xiàn)象的空泡結(jié)構(gòu)；Ⅱ期細(xì)胞核的染色質(zhì)高度凝聚、邊緣化；細(xì)胞凋亡的晚期，細(xì)胞核裂解為碎塊，產(chǎn)生凋亡小體。
羅哌卡因標(biāo)準(zhǔn)品    Ropivacaine     200mg    84057-95-4 
羅匹尼羅相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品        50mg    221264-21-7 
螺內(nèi)酯標(biāo)準(zhǔn)品    Spironolactone     125mg    1952/1/7
螺內(nèi)酯相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品        100mg    976-71-6 
洛伐他汀標(biāo)準(zhǔn)品    Lovastatin     125mg    75330-75-5 
洛伐他汀相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品        20mg    77517-29-4 
洛克沙砷標(biāo)準(zhǔn)品    Roxarsone     200mg    121-19-7 
洛匹那韋標(biāo)準(zhǔn)品    Lopinavir    350mg    192725-17-0 
洛匹那韋系統(tǒng)適配物標(biāo)準(zhǔn)品        10mg    
細(xì)胞系