長期低溫冰凍必然會(huì)導(dǎo)致部分細(xì)胞死亡，而且很多時(shí)候我們要把細(xì)胞樣本拿來重新接種做實(shí)驗(yàn)，所以解凍再凍的過程也會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡。那么起始樣本的細(xì)胞濃度就要達(dá)到一定的高度，這樣在以后保存的過程中就算死亡一些細(xì)胞，我們也還有很多有效細(xì)胞可以用，一般來說這個(gè)起始細(xì)胞密度要達(dá)到10的七次方的樣子（單位：細(xì)胞/mL）。
除了常見抗凍劑甘油外，我們也會(huì)添加多糖（polysaccharide）或者葡聚糖（dextran）或某些蛋白質(zhì)用來吸附在細(xì)胞表面形成保護(hù)薄膜，防止在冷凍過程中對(duì)細(xì)胞的破壞。
另外在解凍細(xì)胞樣本的時(shí)候，在低溫條件下，不要讓整個(gè)細(xì)胞樣本解凍成液體，只要解凍到少量液態(tài)樣本出現(xiàn)就好。這樣也可以幫助更多的樣本存活過一次解-再凍的過程，方便下次或多次使用。
關(guān)于凍干保存，其實(shí)并不是所有的細(xì)菌都適合凍干，有的細(xì)菌沒法在凍干過程中存活。所以如果你實(shí)在需要超長時(shí)間保存（超過十年）你的樣本，一定要自己驗(yàn)證一次，看凍干細(xì)胞再培養(yǎng)能不能成功。