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初級(jí)會(huì)員 | 第10年

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使用血清的時(shí)候注意下列的操作步驟

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1、存放血清的辦法?
 
血清應(yīng)保存在-20℃以下。若存放于4℃時(shí),請(qǐng)勿超過(guò)半個(gè)月。
 
2、如何解凍血清才不會(huì)使質(zhì)量受損?
 
血清從冷凍箱取出后,先置于2-8℃冰箱使之融解,然后在室溫下使之全融,溶解過(guò)程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。
 
3、如何處理血清解凍后出現(xiàn)的絮狀沉淀物?
 
血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因,但主要原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成。血纖素蛋白(形成凝血的蛋白之一)也是造成沉淀物的主要原因之一。但這些絮狀沉淀物并不影響血清本身的質(zhì)量。若欲去除這些絮狀沉淀物,可以將血清分裝至無(wú)菌離心管內(nèi),稍微離心,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過(guò)濾。以過(guò)濾的方法去除這些絮狀沉淀物會(huì)導(dǎo)致過(guò)濾膜的阻塞。
 
4、為什么要熱滅活血清?
 
加熱可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng)。激活的補(bǔ)體將會(huì)參與有關(guān)細(xì)胞的溶解過(guò)程,刺激平滑肌收縮、細(xì)胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。建議在培養(yǎng)ES細(xì)胞、昆蟲(chóng)細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時(shí),使用熱滅活血清。
 
5、有必要做熱滅活嗎?
 
大多數(shù)細(xì)胞的培養(yǎng)不需要經(jīng)過(guò)熱滅活處理的血清。熱滅活血清對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)只有微小的促進(jìn)或*沒(méi)有任何作用,甚至通常因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓幕钚?,造成?xì)胞生長(zhǎng)速度的降低。同時(shí)經(jīng)過(guò)熱處理的血清,沉淀物的形成會(huì)顯著的增多,這些沉淀物會(huì)讓使用者誤以為是微生物的污染。若非必須,可以不需要做熱處理這一步,不但節(jié)省時(shí)間,更確保血清的質(zhì)量。
 
6、如何避免沉淀物的產(chǎn)生?
 
建議在使用血清的時(shí)候,注意下列的操作:
 
(1)解凍血清時(shí),請(qǐng)按照所建議的逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫),若血清解凍時(shí)改變的溫度太大(如-20℃至37 ℃),非常容易產(chǎn)生沉淀物。
 
(2) 解凍血清時(shí),請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生。
 
(3)請(qǐng)勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,血清會(huì)變得混濁,同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會(huì)因此受到損害,而影響血清的質(zhì)量。
 
(4) 血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多。若非必要,可以無(wú)須進(jìn)行熱滅活處理。
 
(5) 若必須做血清的熱滅活,應(yīng)嚴(yán)格控制56℃熱處理30分鐘,并且隨時(shí)搖晃均勻。溫度過(guò)高、時(shí)間過(guò)久以及搖晃不均勻,都會(huì)造成沉淀物的增多。

 

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