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從小鼠腹腔中分離巨噬細(xì)胞

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1.取6周左右的小鼠,剃去腹部的毛并消毒。腹腔注射1ml無菌的液體石蠟或巰基乙酸肉湯或4%淀粉肉湯。3~4天以后收集腹腔細(xì)胞。

2.如要收集腹腔靜置巨噬細(xì)胞,不注射刺激物,直接從這一步開始。放血處死動物,以減少腹腔中的紅細(xì)胞。消毒腹部,沿腹中線注入3~4ml冰中預(yù)冷的無菌PBS-H(含10U/ml肝素和10%小牛血清的PBS)。輕輕按腹部5分鐘。

3.以下均無菌操作。剪開腹壁,用吸管吸出滲出液,再用同樣容量的預(yù)冷PBS-H沖洗腹腔2~3次。合并滲出液于離心管中,4℃離心250×g 10分鐘,去上清液。

4.用預(yù)冷的RPMI-1640培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞3次,每次4℃離心250×g 10分鐘,去上清液。用預(yù)冷的適量RPMI-1640培養(yǎng)液懸浮細(xì)胞,臺盼藍(lán)染色計(jì)數(shù)細(xì)胞并決定細(xì)胞活力。

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