在繼續(xù)探討NCI-H460（H460）人大細胞肺癌細胞的實驗操作步驟時，我們需深入至細胞培養(yǎng)、處理及實驗設(shè)計的核心環(huán)節(jié)。首先，確保實驗室環(huán)境無菌且適宜細胞生長，包括調(diào)整溫度至37°C，維持5% CO?的飽和濕度環(huán)境。

     接下來，進行細胞復(fù)蘇與培養(yǎng)。從液氮罐中迅速取出凍存的H460細胞，于37°C水浴中快速解凍，避免冰晶形成對細胞造成損傷。隨后，將細胞懸液轉(zhuǎn)移至含有預(yù)熱培養(yǎng)基（如RPMI-1640加10%胎牛血清）的離心管中，低速離心去除凍存液，重懸細胞并接種至培養(yǎng)瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。定期觀察細胞生長狀態(tài)，適時更換新鮮培養(yǎng)基，確保細胞處于對數(shù)生長期。

     進入實驗階段，根據(jù)具體研究目的設(shè)計實驗方案。例如，若研究藥物對H460細胞增殖的影響，需設(shè)置不同濃度的藥物處理組及對照組。首先，將細胞以適當密度接種至培養(yǎng)板或培養(yǎng)皿中，待細胞貼壁并達到實驗所需密度后，加入含不同濃度藥物的培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)一定時間（如24、48或72小時）。

     隨后，利用MTT法、克隆形成實驗或流式細胞術(shù)等方法檢測細胞增殖能力、凋亡情況及細胞周期分布等生物學(xué)特性變化。通過數(shù)據(jù)分析，評估藥物對H460細胞的抑制效果及其潛在機制。

     此外，還可結(jié)合分子生物學(xué)技術(shù)，如Western Blot、qPCR等，進一步探究藥物作用下的信號通路變化，為肺癌的靶向治療提供理論依據(jù)和實驗支持。綜上所述，針對NCI-H460細胞的實驗操作步驟需嚴謹細致，結(jié)合多種技術(shù)手段，以全面揭示其在特定條件下的生物學(xué)行為及潛在治療靶點。