芹菜源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒原理簡(jiǎn)述如下:

1. TaqMan熒光探針:PCR擴(kuò)增時(shí)在加入一對(duì)引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)和一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時(shí),報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收;PCR擴(kuò)增時(shí),Taq酶的5'-3'外切酶活性將探針酶切降解,使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào),即每擴(kuò)增一條DNA鏈,就有一個(gè)熒光分子形成,實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術(shù)既可進(jìn)行基因定量分析,又可分析基因突變(SNP),有望成為基因診斷和個(gè)體化用藥分析的*技術(shù)平臺(tái)。

2. SYBR熒光染料:在PCR反應(yīng)體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料非特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后,發(fā)射熒光信號(hào),而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號(hào),從而保證熒光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。SYBR僅與雙鏈DNA進(jìn)行結(jié)合,因此可以通過溶解曲線,確定PCR反應(yīng)是否特異。

3. 分子信標(biāo):是一種在5和3末端自身形成一個(gè)8個(gè)堿基左右的發(fā)夾結(jié)構(gòu)的莖環(huán)雙標(biāo)記寡核苷酸探針,兩端的核酸序列互補(bǔ)配對(duì),導(dǎo)致熒光基團(tuán)與淬滅基團(tuán)緊緊靠近,不會(huì)產(chǎn)生熒光。PCR產(chǎn)物生成后,退火過程中,分子信標(biāo)中間部分與特定DNA序列配對(duì),熒光基因與淬滅基因分離產(chǎn)生熒光 。

大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞

HUVEC, 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞

人臍動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞

人臍靜脈平滑肌細(xì)胞

人臍動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞

人臍帶血單個(gè)核細(xì)胞

小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（EGFP標(biāo)記）

人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（hMSCs）

人間充質(zhì)干細(xì)胞-脂肪

人間充質(zhì)干細(xì)胞-肝

人間充質(zhì)干細(xì)胞-臍帶

小鼠神經(jīng)干細(xì)胞

小鼠海馬神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞（EGFP標(biāo)記）

小鼠皮層神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞（EGFP標(biāo)記）

小鼠神經(jīng)干細(xì)胞（EGFP標(biāo)記）

人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞

人腦血管平滑肌細(xì)胞

人海馬神經(jīng)元

人少突膠質(zhì)細(xì)胞

人星形膠質(zhì)細(xì)胞

小鼠成纖維細(xì)胞（EGFP標(biāo)記）

mCF, 小鼠心臟成纖維細(xì)胞

MN-c, 小鼠皮質(zhì)神經(jīng)元

MN-h, 小鼠海馬神經(jīng)元

MSC, 小鼠雪旺細(xì)胞

MA, 小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞

MLF, 小鼠淋巴成纖維細(xì)胞

mRTEC, 小鼠腎小管上皮細(xì)胞

CSC, 小鼠心肌細(xì)胞

mEPC, 小鼠內(nèi)皮祖細(xì)胞-骨髓

MEF, 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞

NSC，大鼠神經(jīng)干細(xì)胞

RN-h, 大鼠海馬趾神經(jīng)元

rEPC，大鼠內(nèi)皮祖細(xì)胞-骨髓

RN-c, 大鼠皮質(zhì)神經(jīng)元