黑素瘤細(xì)胞黏附分子(MCAM)ELISA試劑盒操作步驟:

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔，在di一、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl，然后在di一、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后從di一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為180 ng/L，120 ng/L ，60 ng/L，30 ng/，15 ng/L）。

2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4. 配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。

7. 溫育：操作同3。

8. 洗滌：操作同5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘。

小鼠血清淀粉樣蛋白(mouse SAA)

小鼠S-100蛋白(mouse S-100)

小鼠性激素結(jié)合球蛋白(mouse SHBG)

小鼠超氧化物歧化酶(mouse SOD)

小鼠生長(zhǎng)抑素(mouse Somatostatin)

小鼠生長(zhǎng)抑素受體亞型(mouse SSTR2)

小鼠干細(xì)胞生長(zhǎng)因子(mouse SCF)

小鼠基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1(mouse SDF-1)

小鼠基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1a(mouse SDF-1a)

小鼠基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1R(mouse SDF-1R)

小鼠可溶性E-選擇素(mouse sE-Selectin/sCD62E)

小鼠可溶性L-選擇素(mouse sL-Selectin/sCD62L)

小鼠可溶性P-選擇素(mouse sP-Selectin/sCD62P)

小鼠P物質(zhì)(mouse Substance P)

小鼠催乳素(mouse PRL)

小鼠孕酮(mouse PROG)

小鼠睪酮(mouse TESTO)

小鼠胸腺活化調(diào)節(jié)趨化因子(mouse TARC)

小鼠凝血酶抗凝血酶復(fù)合物(mouse TAT)

小鼠組織因子(mouse TF)

小鼠組織因子抑制物(mouse TFPI)

小鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(mouse TGF-β1)

小鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β2(mouse TGF-β2)

小鼠可溶性粒細(xì)胞靶受體(mouse sTREM-1)

小鼠端粒酶(mouse Telomerase)

小鼠Toll樣受體-2(mouse TLR-2)

小鼠Toll樣受體-4(mouse TLR-4)

小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-1(mouse TIMP-1)

小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-2(mouse TIMP-2)

小鼠腫瘤壞死因子-a(mouse TNF-a)

小鼠腫瘤壞死因子-b(mouse TNF-b)