ELISA試劑盒實驗原理

酶聯(lián)免疫吸附測定(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)原理

1971年Engvall和Perlmann發(fā)表了酶聯(lián)免疫吸附劑測定(enzyme linked immunosorbent 

assay，ELISA)用于IgG定量測定的文章，使得1966年開始用于抗原定位的酶標抗體技術(shù)發(fā)展成

液體標本中微量物質(zhì)的測定方法。

大鼠ELISA試劑盒的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗

體仍保持其免疫學活性，酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性，又保留酶的活性。在測定

時，受檢標本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使

固相載體上形成的抗原抗體復合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標記的抗原或抗體，也

通過反應而結(jié)合在固相載體上。此時固相上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入

酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故

可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析。

由于酶的催化頻率很高，故可極大地地放大反應效果，從而使測定方法達到很高的敏感度

如何正確使用酶結(jié)合物?

1.酶結(jié)合物的稀釋液

在稀釋液中常加入高濃度的無關(guān)蛋白質(zhì)(例如1%BSA或5%脫脂奶粉)，通過競爭抑制酶結(jié)合物在

固相載體上的非特異性吸附。一般還加入能夠抑制蛋白質(zhì)吸附于塑料表面的非離子型表面活性

劑，如吐溫20(0.05%的濃度較為適宜)。

2.正確稀釋酶結(jié)合物

酶結(jié)合物的合適工作濃度需要通過預實驗來確定，濃度過高易導致本底偏高，濃度過低則會導

致陽性信號的減弱。

酶結(jié)合物在使用前稀釋，稀釋后的酶結(jié)合物不宜長期保存，因為低濃度的酶結(jié)合物極易失

活。