細胞株培養(yǎng)的基本技術(shù)
為了減少污染對細胞培養(yǎng)的影響，必須建立細胞凍存庫。當需要做實驗時從主細胞庫中復(fù)蘇細胞建立工作細細胞株庫。每一個凍存標本都應(yīng)明確記錄細胞的性質(zhì)、代數(shù)及有無污染。同時還應(yīng)建立規(guī)范的檢測程序進行菌檢及細胞鑒定。
為了保證培養(yǎng)細胞系的完整性，必須進行詳細的實驗記錄，應(yīng)包括以下內(nèi)容:細胞系的種類及來源、有無污染(如細菌，病毒，支原體)、細胞代數(shù)和倍增時間、以及選擇性突變。
詳細的記錄有利于對細胞的遺傳及特性在常規(guī)傳代培養(yǎng)中因突變、污染及各種原因?qū)е碌母淖冞M行分析。經(jīng)過連續(xù)傳代培養(yǎng)的細胞與它較早代數(shù)的凍存細胞相比，隨著培養(yǎng)時間的延長，細胞在適應(yīng)環(huán)境的過程中，其生物特性已發(fā)生了改變。
培養(yǎng)的細胞株由若干生長速度及活力各異的亞群組成。隨著培養(yǎng)時間的延長生長速，度快及活力高的細胞亞群逐漸占優(yōu)勢這種選擇性，趨勢會影響整個細胞群的生物特性。應(yīng)用不同代數(shù)的細胞連續(xù)進行實驗則結(jié)果會發(fā)生偏差。建立細胞凍存庫就能避免這種影響通過復(fù)蘇相同代數(shù)的細胞，人們就能在較為均一的條件下重復(fù)實驗。
細胞株培養(yǎng)工作需要清潔，保持良好的環(huán)境及規(guī)范的操作程序。超凈工作臺是細胞培養(yǎng)中普遍使用的無菌操作裝置，它需要合理的布置及經(jīng)常性的維護。超凈工作臺的工作原理是驅(qū)動經(jīng)濾菌凈化后的空氣，通過工作臺面形成氣流屏障，從而阻止外界污染物的侵入并使操作過程中產(chǎn)生的飛沫限制在超凈工作臺中。因為操作過程中可能產(chǎn)生有毒的物質(zhì)，所以采用垂直氣流比水平氣流安全。