當(dāng)前位置:上海谷研實(shí)業(yè)有限公司>>生化檢測試劑盒>>輔酶Ⅰ系列>> 檸檬酸合酶(CS)可見分光光度法檢測試劑盒
貨號 | GOY-01S6336 |
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操作步驟:
實(shí)驗(yàn)開始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測樣品含量,如樣品濃度過高時,應(yīng)對樣品進(jìn)行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍,計算時再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
1. 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl(在使用前一小時內(nèi)配制),酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。
3. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
4. 每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液) 100μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。
5. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
7. 依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng),此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。
商品屬性:
產(chǎn)品名稱 | |
規(guī)格 | 50管/24樣 |
檢測方法 | 可見分光光度法 |
貨號 | GOY-01S6336 |
商品介紹:
測定意義
CS(EC 2.3.3.1)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體基質(zhì)中,是三羧酸循環(huán)第一個限速酶,是三羧酸循環(huán)主要調(diào)控位點(diǎn)之一。
測定原理
CS催化乙酰CoA和草酰乙酸產(chǎn)生檸檬酰,進(jìn)一步水解產(chǎn)生檸檬酸;該反應(yīng)促使無色的DTNB轉(zhuǎn)變成黃色的TNB,在 412nm處有特征吸光值。
需自備的儀器和用品
可見分光光度計、臺式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水
實(shí)驗(yàn)方法學(xué):
一、肝素的配制: 市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?/span>0.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。 肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動,每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。 | 二、血液樣本的收集: 全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時,不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。 1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時,直接低速離心分離出血清待用或保存。 2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA。 |
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測定。
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檸檬酸合酶(CS)可見分光光度法檢測試劑盒無水碳 99.995% metals basis人麻疹病(MV)抗體(IgM)免疫試劑盒CD163蛋白樣1抗體Phospho-PLC gamma 1 (Tyr771) 化酯Cγ1抗體
無水碳 ACS, ≥99.0% 人麻疹病(MV)抗體(IgG)免疫試劑盒周期素依賴性激5調(diào)節(jié)蛋白1樣蛋白1抗體Phospho-PLC beta3 (Ser537) 化酯Cβ3抗體
硝 AR,99.0%人落葉型天皰瘡抗體(PF-Ab)免疫試劑盒22號染色體開放閱讀框31抗體Phospho-PLC beta3 (Ser1105) 化酯Cβ3抗體
硫 CP,98.5%人絡(luò)氨(TYR)免疫試劑盒分裂周期37樣蛋白1抗體phospho-PLB/phospholamban(phospho Ser16+Thr17) 化心臟蛋白抗體
鹽脒,水合 98%人輪狀病抗原(RV Ag)免疫試劑盒羧肽X(M14家族1)抗體phospho-PLB(Ser16) 化心臟蛋白抗體
4- 99.0%人輪狀病(RV)抗體(IgG)免疫試劑盒卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白135抗體Phospho-PKR (Thr451) 化蛋白激R抗體
4- 97%人輪狀病(RV)IgM 免疫試劑盒跨膜結(jié)構(gòu)域邊緣蛋白CEE抗體Phospho-PKR (Thr446/451) 化蛋白激R抗體
1-氨茚滿 98%人卵清蛋白特異性IgG(OVA sIgG)免疫試劑盒分子伴侶CESK1蛋白抗體Phospho-PKR (Thr446) 化蛋白激R抗體
水楊 98%人卵清蛋白特異性IgE(OVA sIgE)免疫試劑盒卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白124抗體phospho-PKMYT1(Thr495) 化髓鞘轉(zhuǎn)錄因子1激抗體
1-氨茚滿 98%人卵清白蛋白免疫試劑盒CDK5激活結(jié)合蛋白1抗體Phospho-PKM2 (Tyr105) 化酮激M2抗體
鹽 98%人卵泡抑素樣蛋白1(FSTL-1)免疫試劑盒化表面趨化因子受體4相關(guān)蛋白2抗體Phospho-PKC gamma (Thr674) 化蛋白激C亞型G抗體
(R)-(+)-2,2'-雙(二膦)-1,1'-聯(lián)萘 98%人卵泡抑素(FS)免疫試劑盒腫瘤/抗原1B/1APhospho-PKC gamma (Thr514) 化蛋白激C亞型G抗體
(S)-(-)-2,2'-雙(二膦)-1,1'-聯(lián)萘 98%人卵脂免疫試劑盒化分裂周期蛋白25B抗體phospho-PKC delta (Tyr52) 化蛋白激C亞性D型抗體
(±)-2,2'-雙-(二膦)-1,1'-聯(lián)萘 98%人卵脂膽固酰轉(zhuǎn)移(LCAT)免疫試劑盒跨膜蛋白12抗體phospho-PKC delta (Tyr311) 化蛋白激C亞性D型抗體
(R)-(-)-1,1'-聯(lián)-2-萘酚二(三氟磺酯) 98%人卵巢癌抗原X1(OVX1)免疫試劑盒免疫球蛋白超家族成員16抗體phospho-PKC delta (Thr505) 化蛋白激C亞性D型抗體
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