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組成及試劑配制:
1、綿羊痘病毒(SPPV)核酸檢測試劑盒說明書價格酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
產品名稱 | 英文名稱 | 價格 |
綿羊痘病毒(SPPV)核酸檢測試劑盒說明書價格 | 48T | 電詢 |
樣本采集、存放及運輸:
1、樣本采集:各類型樣本按照常規(guī)方法采集;
2、存放:樣本在2~8℃條件下保存應不超過72h,-70℃以下可長期保存,但應避免反復凍融(多凍融3次);
3、運輸:采用泡沫箱加冰密封進行運輸。
【標本要求】
人體鼻腔或咽部分泌物:用無菌捻拭子拭取鼻腔或咽部分泌物,將分泌物或咽拭子置入無菌玻璃管(含0.4ml滅菌生理鹽水),用無菌棉球將試管塞緊后,密閉送檢。標本可立即用于檢測,也可保存于-20℃待測。
【檢驗方法】
1.標本、對照品的核酸裂解處理
用商品化(取得醫(yī)療器械許可證)的RNA提取試劑盒處理標本,具體操作參見該試劑盒說明書。
或用Trizol法提取,方法如下:取100?l樣品置于1.5ml 離心管中,加入300?l裂解液(Trizol),再加入100, 混勻器上振蕩混勻5sec或顛倒混勻15次; 13000rpm離心15min, 吸取上層液體,加入等體積異丙醇,顛倒混勻室溫靜置10min, 13000rpm離心10min,輕輕倒去上清;加入700?l 75%乙醇,顛倒洗滌,13000rpm離心5min,輕輕倒去上清,倒置于吸水紙上,棄盡液體或4000rpm離心5sec,將管壁上的殘余液體甩到管底部,用微量加樣器盡量吸干液體,加入20?l DEPC-H2O溶解RNA。
2.試劑配制
取n×19?l H7N9核酸熒光PCR檢測混合液與n×1?l RT-PCR酶(n為反應管數(shù)),振蕩混勻數(shù)秒, 3000rpm離心數(shù)秒。
3.加樣取上述混合液20?l置于PCR管中,然后將樣品核酸提取液、DEPC-H2O、陽性對照品各5?l分別加入PCR管中,蓋好管蓋,立即進行PCR擴增反應。
4. PCR擴增反應管置于定量熒光PCR儀上,推薦循環(huán)參數(shù)設置:
45℃×10min; 95℃×15min;循環(huán)一次,再按95℃×15sec→60℃×60sec,循環(huán)45次;單點熒光檢測在60℃,反應體系為25?l。
熒光通道檢測選擇:選用FAM通道。
copeptin ELISA Kit7號染色體開放閱讀框61抗體和肽素(copeptin)ELISA試劑盒
Tie-2 ELISA Kit少突膠質細胞跨膜蛋白抗體含免疫球蛋白樣環(huán)和上皮生長因子樣域酪氨酸激酶2(Tie-2)ELISA試劑盒
Tie-1 ELISA Kit刺激分子B7-1蛋白抗體含免疫球蛋白樣環(huán)和上皮生長因子樣域酪氨酸激酶1(Tie-1)ELISA試劑盒
setd4 ELISA Kit末端補體復合物抗體含SET域4(setd4)ELISA試劑盒
PNPLA3/ADPN/C22orf20 ELISA Kit8號染色體開放閱讀框55抗體含patatin樣磷脂酶域3(PNPLA3/ADPN/C22orf20)ELISA試劑盒
LPO ELISA Kit補體C4a+C4b蛋白抗體過氧化脂質/乳過氧化物酶(LPO)ELISA試劑盒
LPO ELISA KitCD44V7抗體過氧化脂質(LPO)ELISA試劑盒
PPAR-γ ELISA KitCD44V10抗體過氧化物酶體增殖因子活化受體γ(PPAR-γ)ELISA試劑盒
PPAR-α ELISA KitCD44V4抗體過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α)ELISA試劑盒
PPARGC1 ELISA Kit緊密連接蛋白4抗體過氧化物酶體增殖激活物受體γ輔激活因子1α(PPARGC1)ELISA試劑盒
CAT ELISA Kit6號染色體開放閱讀框140抗體過氧化氫酶(CAT)ELISA試劑盒
C4a ELISA KitL型鈣通道蛋白抗體過敏毒素/補體片斷4(C4a)ELISA試劑盒
ALDOA ELISA Kit電壓依賴性鈣通道Cav3.1抗體果糖二磷酸醛縮酶A(ALDOA)ELISA試劑盒
FRA ELISA Kit緊密連接蛋白3抗體果糖胺(FRA)ELISA試劑盒
FDA ELISA Kit磷酸化原癌基因c-Jun抗體果糖1,6二磷酸醛縮酶(FDA)ELISA試劑盒
P-CK ELISA Kit磷酸化原癌基因c-Jun抗體廣譜細胞角蛋白(P-CK)ELISA試劑盒
CST1 ELISA Kit1號染色體開放閱讀框86抗體胱抑素SN(CST1)ELISA試劑盒
CST7 ELISA Kit8號染色體開放閱讀框59抗體胱抑素F(CST7)ELISA試劑盒
CSTB/CST6/STFB ELISA Kit磷酸化補體成分5受體1抗體胱抑素B(CSTB/CST6/STFB)ELISA試劑盒
CSTA/STF1/STFA ELISA Kit補體C6抗體胱抑素A(CSTA/STF1/STFA)ELISA試劑盒
CAD ELISA Kit癌胚抗原抗體相關細胞粘附分子7抗體胱天蛋白酶激活的脫氧核糖核酸酶(CAD)ELISA試劑盒
Caspase-9 ELISA Kit磷酸化轉錄調節(jié)因子CEBP β抗體胱天蛋白酶9(Caspase-9)ELISA試劑盒
Casp-9 ELISA Kit磷酸化轉錄調節(jié)因子CEBP β抗體胱天蛋白酶9(Casp-9)ELISA試劑盒
Caspase-8 ELISA Kit轉錄調節(jié)因子C/EBPδ抗體胱天蛋白酶8(Caspase-8)ELISA試劑盒
Casp-8 ELISA Kit轉錄調節(jié)因子C/EBPε抗體胱天蛋白酶8(Casp-8)ELISA試劑盒
copeptin ELISA Kit7號染色體開放閱讀框61抗體和肽素(copeptin)ELISA試劑盒
Tie-2 ELISA Kit少突膠質細胞跨膜蛋白抗體含免疫球蛋白樣環(huán)和上皮生長因子樣域酪氨酸激酶2(Tie-2)ELISA試劑盒
Tie-1 ELISA Kit刺激分子B7-1蛋白抗體含免疫球蛋白樣環(huán)和上皮生長因子樣域酪氨酸激酶1(Tie-1)ELISA試劑盒
setd4 ELISA Kit末端補體復合物抗體含SET域4(setd4)ELISA試劑盒
PNPLA3/ADPN/C22orf20 ELISA Kit8號染色體開放閱讀框55抗體含patatin樣磷脂酶域3(PNPLA3/ADPN/C22orf20)ELISA試劑盒
LPO ELISA Kit補體C4a+C4b蛋白抗體過氧化脂質/乳過氧化物酶(LPO)ELISA試劑盒
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PPAR-γ ELISA KitCD44V10抗體過氧化物酶體增殖因子活化受體γ(PPAR-γ)ELISA試劑盒
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PPARGC1 ELISA Kit緊密連接蛋白4抗體過氧化物酶體增殖激活物受體γ輔激活因子1α(PPARGC1)ELISA試劑盒
CAT ELISA Kit6號染色體開放閱讀框140抗體過氧化氫酶(CAT)ELISA試劑盒
C4a ELISA KitL型鈣通道蛋白抗體過敏毒素/補體片斷4(C4a)ELISA試劑盒
ALDOA ELISA Kit電壓依賴性鈣通道Cav3.1抗體果糖二磷酸醛縮酶A(ALDOA)ELISA試劑盒
FRA ELISA Kit緊密連接蛋白3抗體果糖胺(FRA)ELISA試劑盒
FDA ELISA Kit磷酸化原癌基因c-Jun抗體果糖1,6二磷酸醛縮酶(FDA)ELISA試劑盒
P-CK ELISA Kit磷酸化原癌基因c-Jun抗體廣譜細胞角蛋白(P-CK)ELISA試劑盒
CST1 ELISA Kit1號染色體開放閱讀框86抗體胱抑素SN(CST1)ELISA試劑盒
CST7 ELISA Kit8號染色體開放閱讀框59抗體胱抑素F(CST7)ELISA試劑盒
CSTB/CST6/STFB ELISA Kit磷酸化補體成分5受體1抗體胱抑素B(CSTB/CST6/STFB)ELISA試劑盒
CSTA/STF1/STFA ELISA Kit補體C6抗體胱抑素A(CSTA/STF1/STFA)ELISA試劑盒
CAD ELISA Kit癌胚抗原抗體相關細胞粘附分子7抗體胱天蛋白酶激活的脫氧核糖核酸酶(CAD)ELISA試劑盒
Caspase-9 ELISA Kit磷酸化轉錄調節(jié)因子CEBP β抗體胱天蛋白酶9(Caspase-9)ELISA試劑盒
Casp-9 ELISA Kit磷酸化轉錄調節(jié)因子CEBP β抗體胱天蛋白酶9(Casp-9)ELISA試劑盒
Caspase-8 ELISA Kit轉錄調節(jié)因子C/EBPδ抗體胱天蛋白酶8(Caspase-8)ELISA試劑盒
Casp-8 ELISA Kit轉錄調節(jié)因子C/EBPε抗體胱天蛋白酶8(Casp-8)ELISA試劑盒
反應五要素:
參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現(xiàn)二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
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