當(dāng)前位置:上海谷研實業(yè)有限公司>>生化檢測試劑盒>>輔酶Ⅰ系列>> 丙酮酸脫羧酶(PDC)紫外分光光度法
貨號 | GOY-01S6338 |
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商品屬性:
產(chǎn)品名稱 | |
規(guī)格 | 50管/48樣 |
檢測方法 | 紫外分光光度法 |
貨號 | GOY-01S6338 |
商品介紹:
測定意義
PDC主要存在于酵母中,是乙醇發(fā)酵的關(guān)鍵酶之一,催化丙酮酸脫羧生成乙醛。
測定原理:
PDC催化丙酮酸脫羧生成乙醛,添加乙醇脫氫酶(ADH)來進一步催化 NADH還原乙醛生成乙醇和NAD+;NADH在340 nm有吸收峰,而NAD+沒有;通過測定340 nm光吸收下降速率,來計算PDC活性。
自備儀器和用品:
研缽、冰、臺式離心機、紫外分光光度計、1ml石英比色皿、可調(diào)式移液槍和雙蒸水。
實驗方法學(xué):
一、肝素的配制: 市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些。可以取0.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。 肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動,每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。 | 二、血液樣本的收集: 全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時,不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。 1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時,直接低速離心分離出血清待用或保存。 2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA。 |
選擇抗凝的注意點:
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測定。
2-溴-3-十二烷基噻吩 95%2,6-二氯苯肼鹽酸鹽 98%Anti-CK18/FITC 熒光素標記角蛋白18抗體IgG
三苯基膦醋酸鈀 Pd 14.2%2,6-二氟吡-3-酸 95%Anti-CK19/FITC 熒光素標記角蛋白19抗體IgG
1,4-雙(二苯基膦丁烷)二氯化鈀 98%3,4-二氯苯肼鹽酸鹽 97%Anti-CK19/Gold 膠體金離子標記角蛋白19抗體IgG
雙(乙)氯化鈀(II) Pd 41.0%2-氟苯肼鹽酸鹽 97%Anti-CK19/FITC 熒光素標記角蛋白19抗體IgG
雙(二苯基膦) 98%3-氟苯肼鹽酸鹽 97%Anti-CK19/RBITC 紅色熒光素羅丹明標記角蛋白19抗體IgG
1,2-雙(二苯基膦)乙烷 98%6-氟吡-3-酸 96%Anti-CK20/FITC 熒光素標記角蛋白20抗體IgG
1,5-雙(二苯基膦)戊烷 97%2-氟吡-3-酸 97%Anti-CK34 BetaE12/FITC 熒光素標記高分子量角蛋白CK34βE12抗體IgG
1,6-雙(二苯基膦基)己烷 97%2-羥基-5-氟吡 97%Anti-CK-HMW/FITC 熒光素標記高分子量角蛋白抗體IgG
丙酮酸脫羧酶(PDC)紫外分光光度法D-3-氨 98%CCR-4(C-C chemokine receptor 4) 表面趨化因子受體4抗原猴組織蛋白B(CTSB)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
L-2-氨 97%CCR-6/CD196 peptide 表面趨化因子受體6抗原猴胰島素樣生長因子2-mRNA結(jié)合蛋白3(IGF2BP3)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
三氟磺釹 98%CXCR6(CXC-chemokine receptor 6) peptide 表面趨化因子受體6抗原猴重去素(NEB)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
三氟磺鎳(II) 96%CCR-7(CC chemokine receptor 7) CC趨化因子受體7(多肽)猴Apelin蛋白(APLN)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
三氟磺鐠 98%CXCL10/IP-10 CXCL10趨化因子10/干擾素誘導(dǎo)蛋白10抗原猴B分化因子(BCDF)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
三氟磺 98%VEGF(Vascular endothelial growth factor) 血管內(nèi)皮生長因子(多肽抗原)猴Bcl2關(guān)聯(lián)永生因3(BAG3)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
DL-4-溴氨 99%CD10/CALLA (Neutral Endopeptidase) CD10抗原猴原鈣黏素1(PCDH1)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
BOC-D-炔甘氨 95%ZCWCC1(Zinc finger CW-type coiled-coil domain protein 1) ZCWCC1抗原猴谷氨脫羧(GAD)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
BOC-D-3-(2-吡)-氨 99%CD105/Endoglin/TGF- Beta receptor CD105/轉(zhuǎn)化生長因子β受體抗原猴間隙連接蛋白31(CX31)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
FMOC-D-4-溴氨 95%CD138/Syndecan-1 多配體蛋白聚糖1抗原猴色素P450家族成員7A1(CYP7A1)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
L-烯甘氨 95%CD146/MCAM 黑色素瘤粘附分子CD146抗原猴蛋白17(Sp17)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
三氟磺鈉 98%ANPEN/CD13(Aminopeptidase N) 氨肽N抗原猴半糖6硫酯(Gal-6S)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
三氟磺銀(Ⅰ) 97%CD14(cluster of differentiation antigen 14) CD14/內(nèi)素受體抗原猴胱天蛋白12(Casp12)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
三氟磺釤 98%CD28 CD28抗原猴GATA結(jié)合蛋白3(GATA3)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
三銀 98%CD166/ALCAM(activated leukocyte celladhesion molecule) 活化白粘附分子抗原猴血管生成素樣蛋白3(ANGPTL3)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
操作步驟:
實驗開始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。實驗前應(yīng)預(yù)測樣品含量,如樣品濃度過高時,應(yīng)對樣品進行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍,計算時再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
1. 加樣:分別設(shè)空白孔、標準孔、待測樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實驗結(jié)果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。
2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl(在使用前一小時內(nèi)配制),酶標板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。
3. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
4. 每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液) 100μl,酶標板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。
5. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,酶標板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
7. 依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng),此時藍色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結(jié)果的準確性,底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。
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