小鼠胚胎干細(xì)胞-上海谷研實(shí)業(yè)有限公司

貨號	GOY-01X1408

公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、*、實(shí)驗(yàn)效果好，我司為您提供免費(fèi)代測服務(wù)，同時提供最新價格、說明書、規(guī)格、用途、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說明。

產(chǎn)品名稱	小鼠胚胎干細(xì)胞
規(guī)格	5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
分類	原代細(xì)胞
貨號	GOY-01X1408

商品介紹：

名稱 小鼠胚胎干細(xì)胞

2.組織來源：囊胚

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4.細(xì)胞簡介：

小鼠胚胎干細(xì)胞分離自囊胚胚胎組織；胚胎干細(xì)胞（Embryonic stem cell，ESCs，簡稱ES、EK或ESC細(xì)胞）是早期胚胎（原腸胚期之前）或原始性腺中分離出來的一類細(xì)胞，它具有體外培養(yǎng)無限增殖、自我更新和多向分化的特性。無論在體外還是體內(nèi)環(huán)境，ES細(xì)胞都能被誘導(dǎo)分化為機(jī)體幾乎所有的細(xì)胞類型。進(jìn)一步說，胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）是一種高度未分化細(xì)胞。它具有發(fā)育的全能性，能分化出成體動物的所有組織和器官，包括生殖細(xì)胞。ES細(xì)胞具有與早期胚胎細(xì)胞相似的形態(tài)結(jié)構(gòu)，細(xì)胞核大，有一個或幾個核仁，胞核中多為常染色質(zhì)，胞質(zhì)胞漿少，結(jié)構(gòu)簡單。體外培養(yǎng)時，細(xì)胞排列緊密，呈集落狀生長。用堿性磷酸酶染色，ES細(xì)胞呈棕紅色，而周圍的成纖維細(xì)胞呈淡黃色。細(xì)胞克隆和周圍存在明顯界限，形成的克隆細(xì)胞彼此界限不清，細(xì)胞表面有折光較強(qiáng)的脂狀小滴。細(xì)胞克隆形態(tài)多樣，多數(shù)呈島狀或巢狀。小鼠ES細(xì)胞的直徑7 微米～18 微米，豬、牛、羊ES細(xì)胞的顏色較深，直徑12 微米～18 微米。胚胎干細(xì)胞與普通細(xì)胞有顯著差別，有其特定的生長特性和特定的標(biāo)志，例如堿性磷酸酶活性非常高，帶有胚胎階段特異性表面抗原（ Stage- specific embryonic antigens,SSEA），人類胚胎干細(xì)胞還帶有高分子量的糖蛋白TRA1-60、TRA-1-81等標(biāo)志，這些特性和標(biāo)志均可以用于對胚胎干細(xì)胞進(jìn)行鑒定，除此之外，胚胎干細(xì)胞還可以在體外傳代，并保持正常核型。在體外培養(yǎng)體系中加入分化抑制劑如白血病抑制因子（ Leukaemia inhibitory factor,LF）或者在小鼠胚胎成纖維細(xì)胞飼養(yǎng)層（MEF）上培養(yǎng)時，胚胎干細(xì)胞都能呈克隆性增殖，長期保持核型正常和穩(wěn)定，凍存解凍也不影響不分化的特性。另外，胚胎干細(xì)胞還表現(xiàn)岀高水平端粒酶活性，目前證明端粒酶與細(xì)胞衰老密切相關(guān)，多數(shù)成熟細(xì)胞的端粒酶活性都很低。這些都是胚胎干細(xì)胞與成熟細(xì)胞不同的重要特點(diǎn)，也可能是其復(fù)制生命期限遠(yuǎn)比體細(xì)胞長的原因。

5.方法簡介：

()實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠胚胎干細(xì)胞采用分離囊胚組織，去除胚胎透明帶、使用特制專用培養(yǎng)基篩選培養(yǎng)，消化傳代純化制備而來，細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶。

6.質(zhì)量檢測：

()實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠胚胎干細(xì)胞經(jīng)Oct-4免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息：

包被條件明膠（0.1%）

培養(yǎng)基含LIF、BMP、Penicillin、Streptomycin等

產(chǎn)品貨號CM-M314

換液頻率每2-3天換液一次；

生長特性貼壁

細(xì)胞形態(tài)短梭形、多角形

傳代特性可傳5-8代左右

消化液0.025%

培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5%

使用方法：

收到細(xì)胞后，請按照以下方法進(jìn)行操作。

1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時或者過夜，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

2. 待細(xì)胞達(dá)到80%匯合時準(zhǔn)備進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

3. 細(xì)胞傳代

1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次；

2) 添加0.125%消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中，37℃溫浴3min左右；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入*培養(yǎng)液終止消化；

3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2或1:3等適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行接種傳代，然后補(bǔ)充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL，放入37℃，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4) 待細(xì)胞*貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。

培養(yǎng)操作：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入 4mL 培養(yǎng)基混合均勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓脫落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
圖片13.jpg

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

主動脈內(nèi)皮細(xì)胞 1×106 5×106

主動脈平滑肌細(xì)胞 1×106 5×106

大隱靜脈平滑肌細(xì)胞 1×106 5×106

冠狀動脈平滑肌細(xì)胞 1×106 5×106

淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞 1×106 5×106

淋巴管成纖維細(xì)胞 1×106 5×106

外周血白細(xì)胞 1×106 5×106

頜下腺上皮細(xì)胞 1×106 5×106

腮腺細(xì)胞 1×106 5×106

食管上皮細(xì)胞 1×106 5×106

食管平滑肌細(xì)胞 1×106 5×106

胃粘膜上皮細(xì)胞 1×106 5×106

腸平滑肌細(xì)胞 1×106 5

小鼠胚胎干細(xì)胞BGS 瓊脂進(jìn)口、國產(chǎn)BGS Agar用于沙門氏菌的分離培養(yǎng)(USDA-FSIS方法)250兔子S100B蛋白(S-100B)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

堿性蛋白胨水進(jìn)口、國產(chǎn)Alkaline Peptone Water用于霍亂弧菌選擇性增菌培養(yǎng)(SN標(biāo)準(zhǔn))250兔子L選擇素(L-Selectin)免疫試劑盒*直銷

TCBS瓊脂進(jìn)口、國產(chǎn)Thiosulfate Citrate Bile Salts Sucrose Agar用于致病性弧菌的選擇性分離（GB、SN標(biāo)準(zhǔn)）250兔子E選擇素(E-Selectin/CD62E)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

氯化鈉B肉湯基礎(chǔ)(SCPB) 進(jìn)口、國產(chǎn)Sodium Chloride Polymyxin Broth Base用于副溶血性弧菌選擇性增菌培養(yǎng)，用前應(yīng)無菌加入B（SN標(biāo)準(zhǔn)）250兔子D-乳酸免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

B 進(jìn)口、國產(chǎn)添加于100mlHB4131中2.5萬單位/支*5兔子D二聚體(D2D)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

精雙水解試驗(yàn)用培養(yǎng)基(AD)進(jìn)口、國產(chǎn)生化培養(yǎng)基，用于弧菌的精試驗(yàn)5兔子Dickkopf 1(DKK1)免疫試劑盒*直銷

慶大瓊脂進(jìn)口、國產(chǎn)Gentamycin Agar用于霍亂弧菌選擇性分離培養(yǎng)250兔子C反應(yīng)蛋白(CRP)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

四號瓊脂基礎(chǔ) 進(jìn)口、國產(chǎn)No.4 Agar Base用于霍亂弧菌選擇性分離培養(yǎng)，滅菌冷至50℃加入亞碲酸鉀，倒平板250兔子CD34分子(CD34)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

我妻氏培養(yǎng)基基礎(chǔ) 進(jìn)口、國產(chǎn)Wagstsuma Agar Base用于神奈川現(xiàn)象試驗(yàn)（SN標(biāo)準(zhǔn)）250兔子B細(xì)胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

60%/L氯化鈉蛋白胨肉湯進(jìn)口、國產(chǎn)60%/L NaCl Peptone Water用于副溶血性弧菌的前增菌培養(yǎng)250兔子8羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)免疫試劑盒*直銷