細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、*、實(shí)驗(yàn)效果好，我司為您提供免費(fèi)代測服務(wù)，同時(shí)提供最新價(jià)格、說明書、規(guī)格、用途、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說明。

商品介紹：

使用方法：

收到細(xì)胞后，請按照以下方法進(jìn)行操作。

1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時(shí)或者過夜，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

2. 待細(xì)胞達(dá)到80%匯合時(shí)準(zhǔn)備進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

3. 細(xì)胞傳代

1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次；

2) 添加0.125%消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中，37℃溫浴3min左右；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入*培養(yǎng)液終止消化；

3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2或1:3等適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行接種傳代，然后補(bǔ)充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL，放入37℃，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4) 待細(xì)胞*貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。

培養(yǎng)操作：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

兔免疫球蛋白E Fc段受體Ⅱ(FcεRⅡ/CD23)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

兔補(bǔ)體1q(C1q)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

兔微纖絲相關(guān)蛋白4(MFAP4)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

兔甲酰(fMet)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒  

兔癌胚抗原(CEA)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

兔自身抗體(IAA)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

兔樣生長因子結(jié)合蛋白3(IGFBP-3)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

兔法尼基二磷酸法尼基轉(zhuǎn)移1(FDFT1)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒  

兔抗麥膠蛋白/麥溶蛋白抗體(AGA)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒  

兔肌腱蛋白R(

小鼠骨髓單個(gè)核細(xì)胞YGC瓊脂進(jìn)口、國產(chǎn)YGC Agar用于奶和奶制品中霉菌及酵母菌分離培養(yǎng)(ISO方法)250兔一氧化氮(NO)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

改良綠色酵母菌和真菌肉湯進(jìn)口、國產(chǎn)m-GREEN YEAST and FUNGI BROTH用于飲料中真菌及酵母菌檢測(Acumedia方法)250兔氧化低密度脂蛋白抗體(OLAb)免疫試劑盒*直銷

Littman 瓊脂進(jìn)口、國產(chǎn)Littman Agar用于真菌的分離培養(yǎng)(Acumedia方法)250兔血小板選擇素，P -選擇素免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

DG-18瓊脂進(jìn)口、國產(chǎn)DICHLORANGLYCEROL (DG-18) AGAR 用于食品中霉菌和酵母菌分離培養(yǎng)(Acumedia方法)250兔血纖蛋白原(Fbg)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

YM瓊脂進(jìn)口、國產(chǎn)YM Agar用于霉菌、酵母菌及耐酸菌的分離培養(yǎng)(Acumedia方法)250兔血栓素B2(TXB2)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

YM11瓊脂進(jìn)口、國產(chǎn)YM11 Agar濾膜法用于霉菌、酵母菌的分離培養(yǎng)(NEOGEN方法)250兔血栓素A2(TXA2)免疫試劑盒*直銷

OGY瓊脂進(jìn)口、國產(chǎn)OGY Agar用于霉菌和酵母菌分離培養(yǎng)和計(jì)數(shù)(Merck方法)250兔血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

WL營養(yǎng)瓊脂進(jìn)口、國產(chǎn)WL Nutrient Agar用于啤酒和發(fā)酵產(chǎn)品中酵母菌和細(xì)菌的計(jì)數(shù)250兔血紅素氧合1(HMOX1)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

改良沙氏瓊脂培養(yǎng)基   進(jìn)口、國產(chǎn)Sabouraud’s Agar，Modified用于真菌檢測250兔血管性血友病因子/瑞斯托輔因子(VWF)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

沙氏BHI瓊脂進(jìn)口、國產(chǎn)Sabouraud BHI Agar用于真菌檢測(Acumedia 方法)250兔血管生成素2(ANG-2)免疫試劑盒*直銷