組成及試劑配制:
1、小孢子菌屬通用PCR檢測(cè)試劑盒說明書酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B：1×10ml。

樣本采集、存放及運(yùn)輸：
1、樣本采集：各類型樣本按照常規(guī)方法采集；
2、存放：樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h，-70℃以下可長期保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融（多凍融3次）；
3、運(yùn)輸：采用泡沫箱加冰密封進(jìn)行運(yùn)輸。
【標(biāo)本要求】
人體鼻腔或咽部分泌物:用無菌捻拭子拭取鼻腔或咽部分泌物，將分泌物或咽拭子置入無菌玻璃管（含0.4ml滅菌生理鹽水），用無菌棉球?qū)⒃嚬苋o后，密閉送檢。標(biāo)本可立即用于檢測(cè)，也可保存于-20℃待測(cè)。
【檢驗(yàn)方法】
1.標(biāo)本、對(duì)照品的核酸裂解處理
用商品化（取得醫(yī)療器械許可證）的RNA提取試劑盒處理標(biāo)本，具體操作參見該試劑盒說明書。
或用Trizol法提取，方法如下：取100?l樣品置于1.5ml 離心管中，加入300?l裂解液（Trizol），再加入100， 混勻器上振蕩混勻5sec或顛倒混勻15次； 13000rpm離心15min， 吸取上層液體，加入等體積異丙醇，顛倒混勻室溫靜置10min， 13000rpm離心10min，輕輕倒去上清；加入700?l 75%乙醇，顛倒洗滌，13000rpm離心5min，輕輕倒去上清，倒置于吸水紙上，棄盡液體或4000rpm離心5sec，將管壁上的殘余液體甩到管底部，用微量加樣器盡量吸干液體，加入20?l DEPC-H2O溶解RNA。
2.試劑配制
取n×19?l H7N9核酸熒光PCR檢測(cè)混合液與n×1?l RT-PCR酶（n為反應(yīng)管數(shù)）,振蕩混勻數(shù)秒, 3000rpm離心數(shù)秒。
3.加樣取上述混合液20?l置于PCR管中，然后將樣品核酸提取液、DEPC-H2O、陽性對(duì)照品各5?l分別加入PCR管中，蓋好管蓋，立即進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)。
4. PCR擴(kuò)增反應(yīng)管置于定量熒光PCR儀上，推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：
45℃×10min; 95℃×15min;循環(huán)一次，再按95℃×15sec→60℃×60sec，循環(huán)45次;單點(diǎn)熒光檢測(cè)在60℃，反應(yīng)體系為25?l。
熒光通道檢測(cè)選擇：選用FAM通道。

絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶Nek3抗體
中心體相關(guān)蛋白激酶Nek2抗體
神經(jīng)顆粒素抗體
神經(jīng)肽S抗體
神經(jīng)肽S抗體
神經(jīng)肽S受體1/G蛋白偶聯(lián)受體154抗體
G蛋白偶聯(lián)受體66/神經(jīng)調(diào)節(jié)肽U受體1抗體
G蛋白偶聯(lián)受體FM4/神經(jīng)調(diào)節(jié)肽U受體2抗體
神經(jīng)肽S抗體
腎上腺發(fā)育不全相關(guān)蛋白抗體
丙型肝炎病毒非結(jié)構(gòu)蛋白5A反式激活蛋白9抗體
Noxa蛋白抗體
P53誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡抑制蛋白抗體
磷酸化酪氨酸激酶B抗體
磷酸化中心粒蛋白Nudel抗體
磷酸化中心粒蛋白Nudel抗體
線粒體復(fù)合物NDUFS4蛋白抗體
NADH脫氫酶α家族8抗體
NADH脫氫酶黃素蛋白1抗體
NADH脫氫酶黃素蛋白2抗體
NADH氧化還原酶輔酶1抗體
膜內(nèi)在蛋白NOD26抗體
磷酸化谷氨酸受體2B抗體
磷酸化谷氨酸受體2A+2B抗體
高度相似的細(xì)胞周期蛋白激酶NEK6抗體
A型流感病毒-NS1抗體
去甲腎上腺素轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白/神經(jīng)遞質(zhì)去甲腎上腺素轉(zhuǎn)運(yùn)體抗體
磷酸化一氧化氮合成酶3抗體
新的飽食分子蛋白抗體
脊髓灰質(zhì)炎病毒受體相關(guān)蛋白4抗體
細(xì)胞毒性受體NK-p80抗體
細(xì)胞粘附分子CD112抗體
腎小球細(xì)胞粘附分子受體抗體
成纖維細(xì)胞核受體Nr5a2抗體
鈉鈣交換蛋白1抗體
鈉鈣交換蛋白3抗體
天冬氨酸受體抗體
磷酸化核因子2相關(guān)因子2抗體
Nemo樣激酶抗體
磷酸化Nemo樣激酶抗體
磷酸化NIFK抗體
磷酸化NIFK抗體
NCKAP5蛋白抗體
一氧化氮合酶轉(zhuǎn)運(yùn)誘導(dǎo)抗體
中性鞘磷脂相關(guān)因子抗體
人白介素3介導(dǎo)核因子抗體
SH2結(jié)構(gòu)域蛋白3A抗體

反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是末及倒數(shù)第二個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。