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產(chǎn)地 | 進口 | 加工定制 | 是 |
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適用領(lǐng)域 | 科研 |
反應(yīng)五要素:
遲鈍愛德華菌PCR檢測試劑盒品牌參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 價格 |
遲鈍愛德華菌PCR檢測試劑盒品牌 | Edwardsiella tardaPCR | 電詢 |
樣本采集、存放及運輸:
1、遲鈍愛德華菌PCR檢測試劑盒品牌樣本采集:各類型樣本按照常規(guī)方法采集;
2、存放:樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h,-70℃以下可長期保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融(多凍融3次);
3、運輸:采用泡沫箱加冰密封進行運輸。
【標(biāo)本要求】
遲鈍愛德華菌PCR檢測試劑盒品牌人體鼻腔或咽部分泌物:用無菌捻拭子拭取鼻腔或咽部分泌物,將分泌物或咽拭子置入無菌玻璃管(含0.4ml滅菌生理鹽水),用無菌棉球?qū)⒃嚬苋o后,密閉送檢。標(biāo)本可立即用于檢測,也可保存于-20℃待測。
組成及試劑配制:
1、遲鈍愛德華菌PCR檢測試劑盒品牌酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
【檢驗方法】
1.標(biāo)本、對照品的核酸裂解處理
用商品化(取得醫(yī)療器械許可證)的RNA提取試劑盒處理標(biāo)本,具體操作參見該試劑盒說明書。
或用Trizol法提取,方法如下:取100?l樣品置于1.5ml 離心管中,加入300?l裂解液(Trizol),再加入100, 混勻器上振蕩混勻5sec或顛倒混勻15次; 13000rpm離心15min, 吸取上層液體,加入等體積異丙醇,顛倒混勻室溫靜置10min, 13000rpm離心10min,輕輕倒去上清;加入700?l 75%乙醇,顛倒洗滌,13000rpm離心5min,輕輕倒去上清,倒置于吸水紙上,棄盡液體或4000rpm離心5sec,將管壁上的殘余液體甩到管底部,用微量加樣器盡量吸干液體,加入20?l DEPC-H2O溶解RNA。
2.試劑配制
取n×19?l H7N9核酸熒光PCR檢測混合液與n×1?l RT-PCR酶(n為反應(yīng)管數(shù)),振蕩混勻數(shù)秒, 3000rpm離心數(shù)秒。
3.加樣取上述混合液20?l置于PCR管中,然后將樣品核酸提取液、DEPC-H2O、陽性對照品各5?l分別加入PCR管中,蓋好管蓋,立即進行PCR擴增反應(yīng)。
4. PCR擴增反應(yīng)管置于定量熒光PCR儀上,推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置:
45℃×10min; 95℃×15min;循環(huán)一次,再按95℃×15sec→60℃×60sec,循環(huán)45次;單點熒光檢測在60℃,反應(yīng)體系為25?l。
熒光通道檢測選擇:選用FAM通道。
脫氫酶/還原酶家族成員2抗體
牙本質(zhì)磷蛋白抗體
Dermokine β蛋白抗體
DPCR1蛋白抗體
表皮源性蛋白6抗體
雙特異性蛋白磷酸酶7抗體
雙特異性蛋白磷酸酶26抗體(絲裂原活化蛋白激酶磷酸酶8)
阿米洛利結(jié)合蛋白1抗體
S期激酶活化蛋白DBF4A抗體
著絲粒相關(guān)蛋白DSN1抗體
遲鈍愛德華菌PCR檢測試劑盒品牌2-(甲氧基羰基)硼酸374538-03-1
2-甲基喹啉鹽酸鹽3747-74-8
丙二酸甲酯酰37517-81-0
七氟丁酸375-22-4
5-溴-2-氟-6-甲基吡啶375368-83-5
全氟丁基磺酰氟375-72-4
alpha-氰基-鄰-乙腈3759-28-2
4-吡唑甲酸乙酯37622-90-5
1H-吡唑-3-硼酸376584-63-3
3-溴吡啶-5-甲醇37669-64-0
吲哚-2-羧酸乙酯3770-50-1
1H-吡唑-4-甲酸37718-11-9
單鏈,在DNA聚合酶與啟動子的參與下,根據(jù)堿基互補配對原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實驗中發(fā)現(xiàn),DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈,當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性,并設(shè)計引物做啟動子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。( DNA高溫變性低溫復(fù)性)
發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個循環(huán)加酶,使PCR技術(shù)變得非常簡捷、同時也大大降低了成本,PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用,并逐步應(yīng)用于臨床。
槍狀肝吸蟲PCR檢測試劑盒品牌注意事項:1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動力學(xué);8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
以下是槍狀肝吸蟲PCR檢測試劑盒品牌的相關(guān)產(chǎn)品。
磷酸化D酪氨酸激酶衰減蛋白1抗體
磷酸化Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白抗體
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磷酸化Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白抗體
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磷酸化DNA基轉(zhuǎn)移酶1抗體
磷酸化DNA基轉(zhuǎn)移酶1抗體
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7脫氫膽固醇還原酶抗體
槍狀肝吸蟲PCR檢測試劑盒品牌2-氟磺酰2905-21-7
2-磺酰2905-23-9
4-乙炔聯(lián)29079-00-3
間異氰酸酯2909-38-8
2-(*硅基)乙醇2916-68-9
三2923-18-4
2 , 3-二溴-5-甲基吡29232-39-1
三氟甲烷磺酸銀2923-28-6
4-三氟甲肼鹽酸鹽2923-56-0
5-溴-2-氟胺374259
3-氟肼鹽酸2924-16-5
2-氟-3-甲基-5-溴吡啶29312-98-9
特點優(yōu)勢:
1. 槍狀肝吸蟲PCR檢測試劑盒品牌特異性:
2. 重現(xiàn)性:
3. 靈敏性:
4. 實用性:
具有下列特點:
1. 槍狀肝吸蟲PCR檢測試劑盒品牌即開即用,用戶只需要提供病毒 RNA 模板。
2. 兩管式 RT-PCR,一次 RT 反應(yīng)產(chǎn)物可以作為多次 PCR 的模板。本試劑盒提供 10 次的 RT 反應(yīng)試劑和 50 次的 PCR 試劑。
3. 引物經(jīng)過優(yōu)化,特異性高,引物是根據(jù)基因的保守區(qū)域設(shè)計,適用于所有強、中、弱新城疫毒株,產(chǎn)物長度為 421 bp。
4. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。
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