細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：

1.研究的對象是活細胞

在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件，可以根據(jù)實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。

3.研究的樣本可以達到比較均一性

通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞，需要時，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。

4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄

采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備

記錄方式可采用攝影照片、縮時電影、電視等多種手段。

5.研究的范圍比較廣泛

應用的學科領(lǐng)域較為寬廣，如細胞學、免疫學、腫瘤學、生物化學、遺傳學、分子生物學等；

適用的對象范圍廣，從低等動物到高等動物，一種動物的不同年齡階段以及不同組織，都可進行有針對性的研究。

6.研究的費用相對較經(jīng)濟

可提供大量、同一時期、重復性好的、生物學性狀相似的實驗對象。

產(chǎn)品屬性：

產(chǎn)品介紹：

名稱    視網(wǎng)膜色素上皮細胞

2.組織來源：視網(wǎng)膜組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

4.細胞簡介：

人視網(wǎng)膜色素上皮細胞分離自視網(wǎng)膜組織；視網(wǎng)膜居于眼球壁的內(nèi)層，是一層透明的薄膜。視網(wǎng)膜由色素上皮層和視網(wǎng)膜感覺層組成，兩層間在病理情況下可分開，稱為視網(wǎng)膜脫離。色素上皮層與脈絡膜緊密相連，由色素上皮細胞組成，它們具有支持和營養(yǎng)光感受器細胞、遮光、散熱以及再生和修復等作用。組織學上視網(wǎng)膜分為10層，由外向內(nèi)分別為：色素上皮層、視錐、視桿細胞層、外界膜、外顆粒層、外叢狀層、內(nèi)顆粒層、內(nèi)叢狀層、神經(jīng)節(jié)細胞層、神經(jīng)纖維層、內(nèi)界膜。視網(wǎng)膜內(nèi)層為襯于血管膜內(nèi)面的一層薄膜，有感光作用；后部鼻側(cè)有一視神經(jīng)乳頭。視網(wǎng)膜上的感覺層是由三個神經(jīng)元組成。第一神經(jīng)元是視細胞層，專司感光，它包括錐細胞和桿細胞。視桿細胞主要在離中心凹較遠的視網(wǎng)膜上，而視錐細胞則在中心凹處最多。第二層叫雙節(jié)細胞，約有10到數(shù)百個視細胞通過雙節(jié)細胞與一個神經(jīng)節(jié)細胞相聯(lián)系，負責聯(lián)絡作用。第三層叫節(jié)細胞層，專管傳導。視網(wǎng)膜是一層菲薄的但又非常復雜的結(jié)構(gòu)，它貼于眼球的后壁部，傳遞來自視網(wǎng)膜感受器沖動的神經(jīng)纖維跨越視網(wǎng)膜表面，經(jīng)由視神經(jīng)到達出口。視網(wǎng)膜的分辨力是不均勻的，在黃斑區(qū)，其分辨能力*。視網(wǎng)膜色素上皮（RPE）位于脈絡膜和光感受器細胞外節(jié)之間，是視網(wǎng)膜下腔和脈絡膜血管之間的離子、水、營養(yǎng)物質(zhì)和代謝終產(chǎn)物轉(zhuǎn)運通道；主要是由單層色素上皮細胞所構(gòu)成，排列十分規(guī)則。視網(wǎng)膜色素上皮參與循環(huán)，吞噬脫落的光感受器細胞外節(jié)以維持光感受器細胞興奮性，并分泌多種生長因子，幫助維持脈絡膜血管內(nèi)皮細胞和光感受器細胞的結(jié)構(gòu)完整性。細胞呈多角形，細胞分為三部分，即頂部、體部和基底部。視網(wǎng)膜色素上皮細胞無再生能力，細胞死亡后不被替換，而是鄰近的細胞向側(cè)面滑動，以填補死亡細胞遺留下來的空間。視網(wǎng)膜色素上皮位于脈絡膜和光感受器細胞外節(jié)之間，是視網(wǎng)膜下腔和脈絡膜血管之間的離子、水、營養(yǎng)物質(zhì)和代謝終產(chǎn)物轉(zhuǎn)運通道。視網(wǎng)膜色素上皮參與循環(huán)，吞噬脫落的光感受器細胞外節(jié)以維持光感受器細胞興奮性，并分泌多種生長因子，幫助維持脈絡膜血管內(nèi)皮細胞和光感受器細胞的結(jié)構(gòu)完整性。

5.方法簡介：

()實驗室分離的人視網(wǎng)膜色素上皮細胞采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法，并通過上皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質(zhì)量檢測：

()實驗室分離的人視網(wǎng)膜色素上皮細胞經(jīng)S-100免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息：

包被條件鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

產(chǎn)品貨號CM-H129

換液頻率每2-3天換液一次

生長特性貼壁

細胞形態(tài)上皮細胞樣

傳代特性可傳2-3代

消化液0.25%

培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5%

處理方法：

收到細胞后，檢查外包裝是否完整，細胞培養(yǎng)瓶是否完好。如有破損漏液等問題，請即時聯(lián)系。并進行以下操作：

1. 75%酒精棉球擦拭T25細胞培養(yǎng)瓶外部。

2. 將細胞放入37度培養(yǎng)箱中預溫3-4小時后再做處理，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。

3. 預熱培養(yǎng)基（含10%胎牛血清，1%雙抗）。

4. 顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照保存（40×,100×,200×各一張）。

5. ①若細胞密度較小，無菌操作，去掉培養(yǎng)基。每瓶添加第四步中準備的5-6ml培養(yǎng)基。放到37度培養(yǎng)箱培養(yǎng)。待細胞密度達到80%以上，進行傳代。

實驗操作步驟：  

a．采用認可的方案處死嚙齒動物。

b．立即在無菌超凈臺內(nèi)用70％乙醇擦洗整個動物。

c．用無菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用無菌鑷子將皮膚扯向后腿。

d．用另一無菌的剪刀和鑷子切開腹部，取出含有胚胎的子宮，置于無菌的培養(yǎng)皿上。

e．剔除胚胎周圍的包膜，將胚胎放于無菌的含有無菌PBS的100ml燒杯中。

f．漂洗胚胎，去掉PBS。繼續(xù)用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮為止。

注意事項：

1. 正式實驗前請選取幾個樣本做預實驗，以優(yōu)化實驗條件，取得最佳實驗效果。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，

避免開蓋時試劑損失。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。

4. 樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導致錯誤的結(jié)果。

5. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗

并*清除殘留清潔劑。

6. 實驗后完成后所有樣品及接觸過的器皿應按照規(guī)定程序處理。

2 ug pYRP7 pYRP7 低溫運輸，-20℃保存 15.6-1000 pg/ml ELISA Kit for Human Nitric oxide synthase, inducible

1mg 羧肽 Y( 酵母 ) Carboxypeptidase Y -20℃保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Leukocyte cell-derived chemotaxin-2

2 ug pET-43.1a(+) pET-43.1a(+) 低溫運輸，-20℃保存 0.

視網(wǎng)膜色素上皮細胞CNTFR-α  睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子受體α抗體 規(guī)格: 0.1ml

GSK-3β (NT)  糖原合激-3β抗體 規(guī)格: 0.2mlSox9a  轉(zhuǎn)錄因子sox9a抗體 規(guī)格: 0.2ml

Sphingomyelin Synthase 1  鞘磷脂合成1抗體 規(guī)格: 0.2mlnonstructural protein 1/NS1  A型毒-NS1抗體（神經(jīng)氨酸1） 規(guī)格: 0.2ml

Phospho-Paxillin(Ser83)  磷酸化樁蛋白Paxillin抗體 規(guī)格: 0.1ml

CNDP1  肌肽二肽1抗體 規(guī)格: 0.1ml

MRC1/CD206  巨噬細胞甘露糖受體抗體 0.2ml

BAG2  Bcl-2結(jié)合抑凋亡蛋白2抗體 規(guī)格: 0.1ml

glypican 1  磷脂?；嫉鞍拙厶?1抗體 規(guī)格: 0.2ml

50T 通用型病毒RT-PCR檢測試劑盒  低溫運輸，-20℃保存

1 管 K802大腸桿菌 K802 E.coli Strain -80℃保存

2 ug pFLAG-CTS pFLAG-CTS 低溫運輸，-20℃保存

改良愛德華瓊脂基礎 Edwards Medium,Modified 250g