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當(dāng)前位置:上海谷研實(shí)業(yè)有限公司>>生化檢測(cè)試劑盒>>輔酶Ⅱ系列>> 蔗糖磷酸化酶(SP)微量法檢測(cè)試劑盒
貨號(hào) | GOY-01S6367 |
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【友情提示】:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測(cè)。避免給您帶來(lái)不必要的損失,請(qǐng)仔細(xì)閱讀購(gòu)買說(shuō)明!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 檢測(cè)方法 | 貨號(hào) |
100管/96樣 | 微量法 | GOY-01S6367 |
商品介紹
測(cè)定意義 SP(EC2.4.1.7)主要存在于微生物和植物中,裂解葡萄糖苷鍵,催化葡萄糖基轉(zhuǎn)移到果糖、木糖、半乳糖和鼠李糖等,合成相應(yīng)的葡萄糖基低聚糖。此外,SP還能催化合成熊果苷,具有的美白效果,在化妝品工業(yè)中具有重要應(yīng)用。 測(cè)定原理: SP能夠以磷酸為受體,催化蔗糖產(chǎn)生1-磷酸葡萄糖,在葡萄糖磷酸變位酶催化下變位為6-磷酸葡萄糖,在6-磷酸葡萄糖脫氫酶作用下還原NADP+生成NADPH,導(dǎo)致340nm光吸收值增加。測(cè)定340nm吸光度增加速率,即可計(jì)算SP活性。 自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器: 天平、低溫離心機(jī)、恒溫水浴鍋、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。 |
試劑的組成和配制:
提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;
試劑一:液體 5mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:液體 200μL×1 支,4℃保存;
試劑三:液體 4mL×1 瓶,4℃保存;
試劑四:粉劑×2 瓶,4℃保存。
所需的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測(cè)定:
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)!
1、樣本制備
① 組織樣本:
取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進(jìn)行
勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測(cè)液。
【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進(jìn)行提取
② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本:
先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL
提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);
12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。
【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(10
4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測(cè);若渾濁,離心后取上清檢測(cè)。
注意事項(xiàng):
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時(shí)在冰上放置。
2、對(duì)照管只需要做一管。
3、若對(duì)照管吸光值大于 1,建議將試劑二用蒸餾水稀釋 7 倍后使用(10μL 試劑二原液+60μL蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管,對(duì)照管數(shù)值在什么范圍?對(duì)照管的范圍是 0.4-1。對(duì)照管吸光值過(guò)低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用;
(2)沒有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時(shí)間不夠,可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間(反應(yīng)時(shí)間 30min可以延長(zhǎng)到 40min)。對(duì)照管吸光值過(guò)高可能是試劑二未按操作說(shuō)明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般
將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋 10倍后再測(cè),通常可以使測(cè)定正常。
G0/G1期開關(guān)調(diào)節(jié)蛋白2抗體Human TPM4(Tropomyosin-4) ELISA Kit大鼠腦鈉素/腦鈉尿肽(BNP)Elisa測(cè)定試劑盒
G蛋白偶聯(lián)受體GPR162蛋白抗體Human TPPII ELISA Kit大鼠血纖蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)Elisa測(cè)定試劑盒
鋅指蛋白461抗體Human TRIM5 ELISA Kit大鼠單核趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)Elisa測(cè)定試劑盒
G蛋白偶聯(lián)受體109A抗體Human TPP1 ELISA Kit大鼠趨化因子(fractalkine/CX3CL1)Elisa測(cè)定試劑盒
G激錨定蛋白1抗體Human TPPP2 ELISA Kit豬熱休克蛋白20(HSP-20)Elisa測(cè)定試劑盒
DNA修復(fù)蛋白GIYD2抗體Human TPPP3 ELISA Kit兔血管內(nèi)皮粘附分子1(VCAM-1/CD106)Elisa測(cè)定試劑盒
生長(zhǎng)抑制和分化相關(guān)蛋白抗體Human TOR3A(Torsin family 3 member A) ELISA Kit兔組織因子途徑抑制物(TFPI)Elisa測(cè)定試劑盒
中心相關(guān)核蛋白MCM3抗體Human TOR1AIP1 ELISA Kit膜粘連蛋白-A抗體流式組化Anti-Annexin A
蔗糖磷酸化酶(SP)微量法檢測(cè)試劑盒Anti-VWF/FITC 熒光素標(biāo)記血管假性血友病因子/血管性血友病因子抗體IgG綿羊白抗原A(HLA-A)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
Anti-VWF/RBITC 紅色羅丹明標(biāo)記血管假性血友病因子/血管性血友病因子抗體IgG綿羊免疫球蛋白A (IgA)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
Anti-Brucella /HRP 辣根過(guò)氧化物標(biāo)記兔抗羊、牛、豬、人布氏桿菌抗體IgG綿羊脂蛋白脂(LPL)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
Anti-WDR26 /Gold 膠體金離子標(biāo)記Gβ類似蛋白WDR26抗體IgG綿羊促胃液素受體(GasR)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
Anti-WDR26/FITC 熒光素標(biāo)記Gβ類似蛋白WDR26抗體IgG綿羊Slit同源物2(Slit2)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
Anti-WEE1 protein/FITC 熒光素標(biāo)記WEE1蛋白抗體IgG綿羊過(guò)氧化物體增殖物激活受體γ( PPAR-γ)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
Anti-Wnt1/FITC 熒光素標(biāo)記信號(hào)通路Wnt1抗體IgG綿羊蛋白C抑制劑(PCI)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
Anti-Wnt2B/FITC 熒光素標(biāo)記信號(hào)通路Wnt2B抗體IgG綿羊血小板膜糖蛋白II b/III a(GPIIb/IIIa)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
Anti-Wnt3a/FITC 熒光素標(biāo)記信號(hào)通路Wnt3a抗體IgG綿羊脂肪型脂肪結(jié)合蛋白(FABP4)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
Anti-WNT5A/FITC 熒光素標(biāo)記信號(hào)通路Wnt5a抗體IgG綿羊平足蛋白(PDPN)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
Anti-WNT9A/WNT14/FITC 熒光素標(biāo)記信號(hào)通路Wnt9a抗體IgG綿羊半凝集素3(GAL3)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
Anti-WNT10A/FITC 熒光素標(biāo)記信號(hào)通路WNT10A抗體IgG綿羊去素(NA/NE)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
Anti-WRCH-1/FITC 熒光素標(biāo)記WRCH1抗體IgG綿羊叉頭框蛋白O1(FOXO1)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
Anti-WWOX /FITC 熒光素標(biāo)記包含氧化還原的WW域抗體IgG綿羊N-乙酰α-D-氨葡萄糖苷(NAGLU)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
Anti-WIG-1/FITC 熒光素標(biāo)記野生型p53誘導(dǎo)因1抗體IgG綿羊血栓前體蛋白(TpP)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
測(cè)定步驟:
1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至450nm。
2、 試劑三的稀釋:將試劑三用蒸餾水稀釋50倍,用多少配多少。(試劑三和蒸餾水1:49稀釋。
3、 工作液配制:在試劑一加入100μl試劑二,充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。(若一次性測(cè)定樣本較少,可按照實(shí)際用量將試劑一和試劑二按照20ml:0.1ml的比例混勻配制)
4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解(溶解后一周內(nèi)用完)。
5、 樣本測(cè)定(在96孔板中依次加入下列試劑)
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后用于測(cè)定。
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