樣本采集、存放及運(yùn)輸：
1、馬杜拉放線菌PCR檢測(cè)試劑盒規(guī)格樣本采集：各類型樣本按照常規(guī)方法采集；
2、存放：樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過(guò)72h，-70℃以下可長(zhǎng)期保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融（多凍融3次）；
3、運(yùn)輸：采用泡沫箱加冰密封進(jìn)行運(yùn)輸。
【標(biāo)本要求】
馬杜拉放線菌PCR檢測(cè)試劑盒規(guī)格人體鼻腔或咽部分泌物:用無(wú)菌捻拭子拭取鼻腔或咽部分泌物，將分泌物或咽拭子置入無(wú)菌玻璃管（含0.4ml滅菌生理鹽水），用無(wú)菌棉球?qū)⒃嚬苋o后，密閉送檢。標(biāo)本可立即用于檢測(cè)，也可保存于-20℃待測(cè)。
反應(yīng)五要素:
馬杜拉放線菌PCR檢測(cè)試劑盒規(guī)格參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長(zhǎng)度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是末及倒數(shù)第二個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。

【檢驗(yàn)方法】
1.標(biāo)本、對(duì)照品的核酸裂解處理
用商品化（取得醫(yī)療器械許可證）的RNA提取試劑盒處理標(biāo)本，具體操作參見(jiàn)該試劑盒說(shuō)明書(shū)。
或用Trizol法提取，方法如下：取100?l樣品置于1.5ml 離心管中，加入300?l裂解液（Trizol），再加入100， 混勻器上振蕩混勻5sec或顛倒混勻15次； 13000rpm離心15min， 吸取上層液體，加入等體積異丙醇，顛倒混勻室溫靜置10min， 13000rpm離心10min，輕輕倒去上清；加入700?l 75%乙醇，顛倒洗滌，13000rpm離心5min，輕輕倒去上清，倒置于吸水紙上，棄盡液體或4000rpm離心5sec，將管壁上的殘余液體甩到管底部，用微量加樣器盡量吸干液體，加入20?l DEPC-H2O溶解RNA。
2.試劑配制
取n×19?l H7N9核酸熒光PCR檢測(cè)混合液與n×1?l RT-PCR酶（n為反應(yīng)管數(shù)）,振蕩混勻數(shù)秒, 3000rpm離心數(shù)秒。
3.加樣取上述混合液20?l置于PCR管中，然后將樣品核酸提取液、DEPC-H2O、陽(yáng)性對(duì)照品各5?l分別加入PCR管中，蓋好管蓋，立即進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)。
4. PCR擴(kuò)增反應(yīng)管置于定量熒光PCR儀上，推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：
45℃×10min; 95℃×15min;循環(huán)一次，再按95℃×15sec→60℃×60sec，循環(huán)45次;單點(diǎn)熒光檢測(cè)在60℃，反應(yīng)體系為25?l。
熒光通道檢測(cè)選擇：選用FAM通道。
錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白26抗體96990-18-0HPLC≥98%20mg/支地膚子皂苷Ic

型肝炎病毒核結(jié)合蛋白-1抗體35286-58-9HPLC≥98%20mg/支地榆皂苷I

芳香基硫酸酯酶K抗體35286-59-0HPLC≥98%20mg/支地榆皂苷II

神經(jīng)元突觸前膜蛋白抗體70578-24-4HPLC≥98%20mg/支滇

錨定蛋白G抗體:2141-09-5HPLC≥98%10mg/支碘化木蘭花堿

肌動(dòng)蛋白α/α-SMA/α Actin抗體482-89-3HPLC≥98%20mg/支靛藍(lán)

整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶1型抗體479-41-4HPLC≥97%20mg/支靛玉紅

整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶1型-7抗體 (N端抗體)551-08-6HPLC≥98%20mg/支烯基苯酞

整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶1型-7抗體97-53-0HPLC≥98%0.5ml/支香酚

內(nèi)收蛋白抗體530-57-4HPLC≥99%20mg/支香酸
馬杜拉放線菌PCR檢測(cè)試劑盒規(guī)格1000 unitsCfr13I (Sau96I)1000 units

1200 unitsCfr42I (SacII)1200 units

5x1200 unitsCfr42I (SacII)5x1200 units

2000 unitsCfr42I (SacII)2000 units

1500 unitsCsp6I (CviQI)1500 units

1500 unitsDraI1500 units

7500 unitsDraI, HC7500 units

300 unitsEam1104I (EarI)300 units

1500 unitsEam1104I (EarI)1500 units

1000 unitsEam1105I (AhdI)1000 units

1500 unitsEcl136II (EcoICRI)1500 units
組成及試劑配制:
1、馬杜拉放線菌PCR檢測(cè)試劑盒規(guī)格酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B：1×10ml。