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Tuner(DE3) 感受態(tài)細胞100ul*10規(guī)格

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所  在  地上海市

更新時間:2019-03-10 16:44:27瀏覽次數(shù):228次

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適用領(lǐng)域 其他
Tuner(DE3) 感受態(tài)細胞100ul*10規(guī)格儲存條件-70℃保存,運輸為干冰包裝。自收貨之日起液氮保存至少一年,-70℃保存至少6個月。

中文名稱:Tuner(DE3) 感受態(tài)細胞100ul*10規(guī)格
規(guī)格:100ul*10
用途:生化試劑。(用于科研試驗研究)  
儲存條件: -70℃保存,必須加干冰運輸。自收貨之日起液氮保存至少一年,-70℃保存至少6個月。
外觀:(性狀) 干冰運輸,單加10kg干冰費
單位: 袋
使用說明:
1. Tuner(DE3) 感受態(tài)細胞100ul*10規(guī)格取100 μl感受態(tài)細胞置于冰浴中融化。
2.待感受態(tài)細胞融化后,向感受態(tài)細胞懸液中加入目的DNA(根據(jù)實際情況加入適量的DNA,通常100 μl感受態(tài)細胞能夠被1 ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和),用移液器輕輕吹打混勻,冰浴30min。
3. 42℃熱擊45sec,然后快速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中,冰上靜置2-3min,該過程不要搖動離心管。
4.每個離心管中加入450 μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基(不含抗生素),混勻后置于37℃搖床, 150 rpm振蕩培養(yǎng)45~60min使菌體復(fù)蘇。
5. 根據(jù)實驗需求,取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細胞,加到含相應(yīng)抗生素的SOC或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上,用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開,將平板置于37℃直至液體被吸收,倒置培養(yǎng),37℃培養(yǎng)12~16h。

 


培養(yǎng)方法:
Tuner(DE3) 感受態(tài)細胞100ul*10規(guī)格收到細胞后,在倒置顯微鏡下觀察整個細胞生長情況,如果細胞未長滿,用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內(nèi),嚴格無菌操作,打開細胞培養(yǎng)瓶,留10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。
培養(yǎng)實驗又要開始了,科研工作者又該忙碌了,大家可能都在尋找適合自己的細胞,不用急,我們幫您掌舵,讓您滿意!
傳代方法:細胞*匯合時,倒掉舊液,加入消化液(0.25%胰蛋白酶+0.03%EDTA)2ml消化,顯微鏡下觀察細胞*脫離瓶壁分離成單個細胞后棄掉胰酶,加培養(yǎng)基混勻分瓶,T25瓶中加培養(yǎng)基至6-8ml,T75瓶加培養(yǎng)基至20ml,37℃,5%CO2孵箱培養(yǎng)。

ELISA Kit for Human Intercellular adhesion molecule 4

96T0.312-20 ng/mL人干擾素調(diào)節(jié)因子3(IRF3)ELISA試劑盒人

ELISA Kit for Human Interferon regulatory factor 3

96T0.78-50 ng/mL人肌苷三磷酸酶(ITPA)ELISA試劑盒人

ELISA Kit for Human Inosine triphosphate pyrophosphatase

96T78-5000 pg/mL人胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白5(IGFBP-5)ELISA試劑盒人

ELISA Kit for Human Insulin-like growth factor-binding protein 5

96T0.156-10 ng/mL人干擾素α/β受體(IFNα/βR1)ELISA試劑盒人

ELISA Kit for Human Interferon alpha/beta receptor 1

96T0.156-10 ng/mL人間α-胰蛋白酶抑制因子重鏈H5(ITIH5L)ELISA試劑盒人

ELISA Kit for Human Inter-alpha-trypsin inhibitor heavy chain H5-like protein

96T31.2-2000 pg/mL人肌醇單磷酸酶1(IMPA1)ELISA試劑盒人

ELISA Kit for Human Inositol monophosphatase 1

96T1.25-80 ng/mL人內(nèi)披蛋白(Involucrin)ELISA試劑盒人

ELISA Kit for Human Involucrin
Tuner(DE3) 感受態(tài)細胞100ul*10規(guī)格EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細胞;HH-29

EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細胞;KMY1002

EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細胞;KMY1008

EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細胞;KMY1022

EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細胞;KMY1036

腫瘤細胞

人肺癌細胞;A549 [A-549]

人前列腺癌細胞;DU 145 [DU145;DU-145]

人細胞;Hela

人癌細胞;MCF7
操作方法:
一 、Tuner(DE3) 感受態(tài)細胞100ul*10規(guī)格熱激轉(zhuǎn)化法
1.    從-80℃冰箱取出感受態(tài)細胞冰浴融化后,吸取100μl感受態(tài)細胞轉(zhuǎn)移到-20℃過夜預(yù)冷的搖菌管中,加入質(zhì)?;蜻B接產(chǎn)物,輕輕混勻,冰浴30分鐘。
2.    42℃水浴熱激60秒,迅速放回冰中并靜置2分鐘,該過程不要搖動搖菌管。
3.    向搖菌管中加入900μl 37℃溫浴的SOC或LB(SOC培養(yǎng)基可提高2-3倍轉(zhuǎn)化效率),37℃、180rpm、45分鐘復(fù)蘇菌種。
4.    根據(jù)實驗要求(質(zhì)粒,重組連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化),吸取不同體積已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細胞加到含相應(yīng)抗生素的LB瓊脂培養(yǎng)基上,將細胞均勻涂開。將平板置于37℃至液體被吸收,倒置平       板,37℃過夜培養(yǎng)。如果進行藍白斑篩選操作,將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時。
二、10分鐘快速轉(zhuǎn)化法                             
注:在使用卡那霉素,四環(huán)素等作為篩選抗性時,需要在SOC培養(yǎng)基中復(fù)蘇以提高轉(zhuǎn)化效率,當使用氨芐青霉素作為篩選抗性時,該步驟可以省略。感受態(tài)細胞-DNA混合物在冰上孵育5-10分鐘后加入4倍體積的37℃溫浴的SOC培養(yǎng)基,在37℃ 180rpm孵育1小時,然后轉(zhuǎn)移到37℃預(yù)熱的LB培養(yǎng)基上。
1. 提前15分鐘將用到的篩選培養(yǎng)基平板拿到37℃預(yù)熱。
2. DH 5α感受態(tài)細胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA并用手EP管底輕輕混勻,冰中靜置5分鐘。
3. 用200μl槍將感受態(tài)細胞-DNA混合物轉(zhuǎn)移到已經(jīng)37℃預(yù)熱的LB培養(yǎng)基上,涂均勻,表面無水漬。
4. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進行藍白斑篩選操作,將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時。

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

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