實驗步驟：

1、石蠟切片，常規(guī)脫蠟至水

2、蒸餾水沖洗，pbs 浸泡5 分鐘（如需采用抗原修復，在此步驟后進行）。

3、3%雙氧水去離子水（無色液體）孵育15-20 分鐘，以消除內(nèi)源性過氧物酶活性。

4、滴加試劑A（藍色液體）室溫孵育15-20 分鐘，傾去，勿洗。

5、滴加適當比例稀釋的一抗，37℃孵育2-3 小時或4℃過夜。

6、PBS 沖洗，3 分鐘3 次。

7、滴加試劑B（黃色液體），室溫或37℃孵育15-20 分鐘。

8、PBS 沖洗，3 分鐘3 次。

9、滴加試劑C（橙色液體），室溫或37℃孵育15-20 分鐘。

10、PBS 沖洗，3 分鐘3 次。

11、顯色劑顯色（DAB 或AEC）

12、自來水充分沖洗。

13、如果需要，可進行復染，脫水，透明。

14、選擇適當?shù)姆馄瑒┓馄?/span>

別    名  Axis inhibition protein 1; Axin1; AI316800; Axin; Fu; fused; Kb; Ki; kinky; knobbly; MGC132911.

英文名稱  Anti-phospho-ATG4D(Ser341)   

中文名稱  軸蛋白1抗體

濃    度  1mg/1ml

規(guī) 格  0.1ml/100μg  0.2ml/200μg

抗體來源  Rabbit

克隆類型  polyclonal

交叉反應  Human, Mouse, Rat

產(chǎn)品類型  一抗

研究領域  細胞生物 信號轉(zhuǎn)導 干細胞 細胞周期蛋白

蛋白分子量  predicted molecular weight: 99kDa

性    狀  Lyophilized or Liquid

免 疫 原  KLH conjugated synthetic peptide derived from human Axin1 C-terminus

產(chǎn)品應用   WB=1:100-500  ELISA=1:500-1000  IP=1:20-100  IHC-P=1:100-500  IHC-F=1:100-500  IF=1:100-500

亞    型  IgG

純化方法  affinity purified by Protein A

儲 存 液  0.01M PBS, pH 7.4 with 10 mg/ml BSA and 0.1% Sodium azide

產(chǎn)品應用   WB=1:100-500  ELISA=1:500-1000  IP=1:20-100  IHC-P=1:100-500  IHC-F=1:100-500  IF=1:100-500

（石蠟切片需做抗原修復）

not yet tested in other applications.

optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.

保存條件  Store at -20 °C for one year.

含試劑：

1、一抗（應用：IHC-P=1:400-800 IHC-F=1:400-800 ）

2、無色試劑：內(nèi)源性過氧化物酶阻斷劑

3、試劑A：封閉用正常山羊血清工作液

4、試劑B：標記二抗工作液：標記羊抗兔IgG

5、試劑C：辣根酶標記鏈酶卵白素工作液

6、顯色液D液 (棕色) 1ml

7、顯色液E液（白色）20ml

實驗前準備：

安裝步驟與維護一）一抗稀釋的準備：

方法1. 實驗前，將凍干粉抗體用無菌蒸餾水稀釋（或PBS稀釋），將稀釋后的抗體分裝5-10支（20ulx5支或10ulx10支），放入-20℃保存，用一支拿一支，避免反復凍溶。

方法2. 實驗前,也可將凍干粉抗體用無菌蒸餾水稀釋50ul（或PBS稀釋50ul）成原液:再加50%甘油, 放入-20℃保存，用多少吸多少。

方法3. 預試驗可做幾個梯度1：100、200、400背景高還可做上去，選一個適合的稀釋比例，再正式做。工作液的稀釋-使用抗體稀釋液。

二）DAB顯色液的制備實驗準備：在1毫升試劑E（DAB 底物液）中，加入1滴（約50微升）試劑D（DAB濃縮液），混合均勻，即配成DAB工作液。此溶液必須現(xiàn)用現(xiàn)配，配好后避光保存，6小時內(nèi)使用，剩余的液體應棄去。標本顯色時間一般為室溫 5~20分鐘，請在顯微鏡下觀察顯色的情況，顯色充分后應將標本及時脫水封固。

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