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貨號 | GOY-01X1068 |
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公司細胞現(xiàn)貨供應(yīng),質(zhì)量有保證、*、實驗效果好,我司為您提供免費代測服務(wù),同時提供最新價格、說明書、規(guī)格、用途、實驗原理等相關(guān)操作說明。
產(chǎn)品名稱 | 神經(jīng)少突膠質(zhì)細胞 |
規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 |
分類 | 原代細胞 |
貨號 | GOY-01X1068 |
商品介紹:
名稱 神經(jīng)少突膠質(zhì)細胞 2.組織來源:腦組織 3.產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介: 人神經(jīng)少突膠質(zhì)細胞分離自腦皮層組織;大腦分左右兩個半球,大腦皮質(zhì)(灰質(zhì))覆蓋著每個大腦半球的大部分,它是神經(jīng)元胞體集中的地方。內(nèi)部則是由神經(jīng)纖維或髓鞘構(gòu)成的白質(zhì)。每一個半球都有三個面,即外側(cè)面(約占整個皮質(zhì)面積的1/3)、內(nèi)側(cè)面和底面(占2/3的面積);半球表面有很多深淺不等的溝或裂,溝或裂之間的隆起叫回,它們大大增加了大腦的表面積;大腦外側(cè)面重要的溝、裂有大腦外側(cè)裂、頂枕裂和中央溝。由于三溝裂之界隔,使大腦皮質(zhì)組分為額葉、頂葉、顳葉、枕葉四大部分。少突膠質(zhì)細胞分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng),在銀浸染標本中,少突膠質(zhì)細胞比星狀膠質(zhì)細胞小,其突起也較小而少,呈珠狀,故被稱為少突膠質(zhì)細胞或寡突膠質(zhì)細胞。但是用特異性免疫細胞化學(xué)染色顯示的少突膠質(zhì)細胞,其突起并不少,而且還有許多分支。少突膠質(zhì)細胞的主要功能是在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中包繞軸突、形成絕緣的髓鞘結(jié)構(gòu)、協(xié)助生物電信號的跳躍式高效傳遞并維持和保護神經(jīng)元的正常功能。其異常不僅會導(dǎo)致中樞神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘病變,還會引起神經(jīng)元損傷或精神類疾病,甚至可以引發(fā)腦腫瘤。根據(jù)少突膠質(zhì)細胞的分布和位置可分為三種:①束間少突膠質(zhì)細胞(interfasicular-oligodendrocyte),分布在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的白質(zhì)的神經(jīng)纖維束之間;②神經(jīng)細胞周少突膠質(zhì)細胞(perineuronal-oligodendrocyte),分布在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的灰質(zhì)區(qū),常位于神經(jīng)細胞周圍,與神經(jīng)細胞的關(guān)系密切,故又稱為神經(jīng)細胞周衛(wèi)星細胞(perineuronal-satellite-cell),但在神經(jīng)細胞胞體與此類細胞之間亦常有星形膠質(zhì)細胞的薄片狀突起分隔;③血管周少突膠質(zhì)細胞(pcrivascular-oligodendrocyte),主要分布在中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)的血管周圍。少突膠質(zhì)細胞形成的髓鞘膜是最為特化和復(fù)雜動物細胞膜之一,其上有眾多跨膜蛋白和表面蛋白用以維持髓鞘的致密穩(wěn)定結(jié)構(gòu)。如半乳糖腦苷脂(GC),它是髓鞘的一種主要類脂,用GC抗體鑒別成熟的少突膠質(zhì)細胞是一種比較早的免疫鑒定方法。近十年來,神經(jīng)發(fā)育學(xué)科進展較快,更多的少突膠質(zhì)細胞分子標記物被鑒定出來,如PDGFRa、Mbp、CNP、SOX-10。 5.方法簡介: ()實驗室分離的人神經(jīng)少突膠質(zhì)細胞采用消化、混合細胞營養(yǎng)缺失培養(yǎng)、搖床振蕩結(jié)合差速貼壁法并通過專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測: ()實驗室分離的人神經(jīng)少突膠質(zhì)細胞經(jīng)GC(Galactocerebroside)免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息: 培養(yǎng)基含B-27 Supplement、PDGF-AA、bFGF、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-H121 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態(tài)梭形、多角形 傳代特性不增殖;不傳代 消化液0.25% 培養(yǎng)條件氣相:空氣,95%;CO2,5% |
使用方法:
收到細胞后,請按照以下方法進行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶,75%酒精消毒,拆下封口膜,放入37℃,5% CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時或者過夜,以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 待細胞達到80%匯合時準備進行傳代培養(yǎng)。
3. 細胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細胞一次;
2) 添加0.125%消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中,37℃溫浴3min左右;倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后吸棄消化液,再加入*培養(yǎng)液終止消化;
3) 用吸管輕輕吹打混勻,按1:2或1:3等適當?shù)谋壤M行接種傳代,然后補充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL,放入37℃,5% CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
4) 待細胞*貼壁后,培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。
培養(yǎng)操作:
1)復(fù)蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并 檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,細胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞,根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
2 ug pSP64 pSP64 低溫運輸,-20℃保存 0.625-40 ng/mL 人生長分化因子15(GDF15)ELISA試劑盒
400U RNase抑制劑(人源) Human RNase Inhibitor -20℃保存 0.625-40 ng/mL 大鼠肥大細胞蛋白Ⅱ(Mcpt2)ELISA試劑盒
2 ug pCMV-SPORT6 PPP2R3A pCMV-SPORT6 PPP2R3A 低溫運輸,-20℃保存 0.78-50 ng/mL ELISA Kit for Human Low-dens
神經(jīng)少突膠質(zhì)細胞PRRSV M protein 豬藍耳毒M蛋白抗體 1ml
1瓶 DCS (肉瘤細胞)細胞株 DCS (肉瘤細胞) 低溫運輸和保存
50T 凋亡抑制蛋白Livin基因PCR檢測試劑盒 低溫運輸,-20℃保存
Klotho Klotho多肽蛋白抗體 規(guī)格: 0.1mlNck1/NCK alpha NCK銜接蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml
2 ug pCMV-SPORT6 SNAP25 pCMV-SPORT6 SNAP25 低溫運輸,-20℃保存
含225ml堿性蛋白胨水均質(zhì)袋 Alkaline peptone water 10個/包
30µL α-Actin小鼠單抗 α-Actin Mouse MAb -20℃保存
250ml Glucose-Gelatin Veronal Buffer (GGVB) Glucose-Gelatin Veronal Buffer (GGVB) 常溫保存
酵母浸粉 Yeast Extract Powder 250g
50U Furin 蛋白 Furin Protease -20℃保存
100g DNCTAB(十六烷基基)
Rabbit Anti-rat IgG/PE-Cy7 PE-Cy7標記的兔抗大鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml
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