微生物菌種的培養(yǎng)：

⒈ 孢子制備

⑴ 孢子的制備

一般采用瓊脂斜面培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中含有一些適合產(chǎn)孢子的營(yíng)養(yǎng)成分，如麩皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些無(wú)機(jī)鹽等。碳源和氮源不要太豐富(碳源約為1％，氮源不超過0.5％)，碳源豐富容易造成生理酸性的營(yíng)養(yǎng)環(huán)境，不利于形成，氮源豐富則有利于菌絲繁殖而不利于孢子形成。一般情況下，干燥和限制營(yíng)養(yǎng)可直接或間接誘導(dǎo)孢子形成。面的培養(yǎng)溫度大多數(shù)為28 ℃，少數(shù)為37 ℃，培養(yǎng)時(shí)間為5～14天。

⑵ 霉菌孢子的制備　

霉菌的孢子培養(yǎng)，一般以大米、小米、玉米、麩皮、麥粒等天然農(nóng)產(chǎn)品為培養(yǎng)基。這是由于這些農(nóng)產(chǎn)品中的營(yíng)養(yǎng)成分較適合霉菌的孢子繁殖，而且這類培養(yǎng)基的表面積較大，可獲得大量的孢子。霉菌的培養(yǎng)一般為25～28 ℃，培養(yǎng)時(shí)間為4～14天。

⒉ 種子制備

⑴ 搖瓶種子制備　

搖瓶種子進(jìn)罐，常采用母瓶、子瓶?jī)杉?jí)培養(yǎng)，有時(shí)母瓶種子也可以直接進(jìn)罐。種子培養(yǎng)基要求比較豐富和*，并易被菌體分解利用，氮源豐富有利于菌絲生長(zhǎng)。原則上各種營(yíng)養(yǎng)成分不宜過濃，子瓶培養(yǎng)基濃度比母瓶略高，更接近種子罐的培養(yǎng)基配方。

⑵ 種子罐種子制備　

種子罐種子制備的工藝過程，因菌種不同而異，一般可分為一級(jí)種子、二級(jí)種子和三級(jí)種子的制備。孢子(或搖瓶菌絲)被接入到體積較小的種子罐中，經(jīng)培養(yǎng)后形成大量的菌絲，這樣的種子稱為一級(jí)種子，把一級(jí)種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵，稱為二級(jí)發(fā)酵。如果將一級(jí)種子接入體積較大的種子罐內(nèi)，經(jīng)過培養(yǎng)形成更多的菌絲，這樣制備的種子稱為二級(jí)種子，將二級(jí)種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵，稱為三級(jí)發(fā)酵。同樣道理，使用三級(jí)種子的發(fā)酵，稱為四級(jí)發(fā)酵。

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菌種的培養(yǎng)：

1、菌種是指食用菌菌絲體及其生長(zhǎng)基質(zhì)組成的繁殖材料。菌種分為母種（一級(jí)種）、原種（二級(jí)種）和栽培種（三級(jí)種）三級(jí)。工業(yè)發(fā)酵的有用菌種，其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復(fù)篩。

2、挑選具有某種能力的有用菌種，也稱種子制備，是指菌種在一定條件下，經(jīng)過擴(kuò)大培養(yǎng)成為具有一定數(shù)量和質(zhì)量的純生產(chǎn)菌種的制備過程。以作接入發(fā)酵罐中進(jìn)一步擴(kuò)大菌體量及合成產(chǎn)物之用。

3、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備 菌種制備。

4、保存在沙土管或冷凍管中的生產(chǎn)菌種，用無(wú)菌手續(xù)挑取少許，接入瓊脂斜面培養(yǎng)基上，在25℃（或較高溫度）下培養(yǎng)5～7天（或較長(zhǎng)時(shí)間。所得孢子還需進(jìn)一步用較大表面積的固體培養(yǎng)基以獲得更多孢子（對(duì)于霉菌類孢子制備，多數(shù)采用大米、小米之類的天然培養(yǎng)基）。

5、將培養(yǎng)成熟的斜面孢子制成懸浮液，接種到扁瓶固體培養(yǎng)基上，于25～28℃培養(yǎng)14天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在生產(chǎn)上延續(xù)使用半年左右。

6、如果有些生產(chǎn)菌種不產(chǎn)孢子，如赤霉素產(chǎn)生菌或產(chǎn)孢子不多的，則可采用搖瓶液體培養(yǎng)制得菌絲體，作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發(fā)芽、生長(zhǎng)、繁殖成大量菌體。其中的培養(yǎng)基組分應(yīng)是易于被菌體利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米漿），及無(wú)機(jī)鹽(如磷酸鹽)等。作為發(fā)酵罐的種子應(yīng)生命力旺盛、染色深、菌絲粗壯，無(wú)雜菌及異常菌體。接種量一般在10%～20%。

保存方法：

傳代保存法：培養(yǎng)基的濃度不宜過高，營(yíng)養(yǎng)成分不宜過于豐富，尤其是碳水化合物的濃度應(yīng)在可能的范圍內(nèi)盡量降低。培養(yǎng)溫度通常以稍低于最適生長(zhǎng)溫度為好。若為產(chǎn)酸菌種，則應(yīng)在培養(yǎng)基中添加少量碳酸鈣 [3] 。

液體石蠟覆蓋保存法：該法較前一種方法保存菌種的時(shí)間更長(zhǎng)，適用于霉菌、酵母菌、放線菌及需氧細(xì)菌等的保存。

懸液保存法：

① 蒸餾水保存法：適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線菌，將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數(shù)年。本法應(yīng)注意避免水分的蒸發(fā)。

② 糖液保存法：適用于酵母菌，如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗處保存，可長(zhǎng)達(dá)10年。除此之外，也可使用緩沖液或食鹽水等進(jìn)行保存。

載體保存法：①土壤保存法；②砂土保存法；③硅膠保存法；④磁珠保存法；⑤麩皮保存法；⑥紙片(濾紙)保存法。

常用的冷凍保存法：

① 低溫冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃)：低溫冷凍保存時(shí)使用螺旋口試管較為方便，也可在棉塞試管外包裹塑料薄膜。保存時(shí)菌液加量不宜過多，有些可添加保護(hù)劑。此外，也可用φ5mm的玻璃珠來(lái)吸附菌液，然后把玻璃珠置于塑料容器內(nèi)，再放入低溫冰箱內(nèi)進(jìn)行保存的。

② 干冰保存法(-70℃左右)：即將菌種管插入干冰內(nèi)，再置于冰箱內(nèi)進(jìn)行冷凍保存。

③ 液氮保存法(-196℃)：是適用范圍*的微生物保存法。

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許旺酵母(1R,2S)-2-氨-1,2-二乙 99%大鼠膜相關(guān)脂A2(PLA2G2A)免疫試劑盒間隙連結(jié)蛋白31.9抗體IFNAR1  干擾素α受體抗體

5-氨尿嘧  98%大鼠膜聯(lián)蛋白IV(ANX-IV)免疫試劑盒甘油激2抗體IFN-Alpha/IFNA1/IFNA13/Interferon alpha 1  干擾素α抗體

N-叔丁氧羰-賴氨酯 98.5%大鼠膜聯(lián)蛋白I(ANX-I)免疫試劑盒β-半糖苷1/β-Gal/彈性蛋白受體1抗體IFN-Alpha 2b/Interferon alpha 2/INFA2  干擾素α2b抗體

Cbz-L-蘇氨芐酯 98%大鼠膜聯(lián)蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)免疫試劑盒甘氨脫羧P蛋白抗體IFNA4/IFNA76/IFNA M1  干擾素α4抗體

N-叔丁氧羰-L-天冬氨 4-叔丁酯二環(huán)己鹽  98%大鼠繆勒管抑制物質(zhì)/抗繆勒管激素(AMH)免疫試劑盒核孔蛋白GLE1抗體IFNA21/IFNA F  干擾素α21抗體

叔丁氧羰酰正亮氨二環(huán)己鹽   ≥98.5%大鼠免疫球蛋白M(IgM)免疫試劑盒腎小球上皮蛋白1抗體IFNA17/Interferon alpha 17/IFNA88  干擾素α17抗體

N-Boc-L-亮氨  97%大鼠免疫球蛋白G(IgG)免疫試劑盒轉(zhuǎn)錄因子Gli4/鋅指蛋白gli4抗體IFNA16/Interferon alpha 16  干擾素α16抗體

4-溴咪唑 97%大鼠免疫球蛋白E(IgE)免疫試劑盒麥角蛋白抗體IFNA11/Limitin/Interferon alpha 11  干擾素α11抗體

(溴)環(huán)丁烷 98%大鼠免疫球蛋白A(IgA)免疫試劑盒膠質(zhì)瘤發(fā)病相關(guān)蛋白1抗體IFNA10/Interferon alpha10/Interferon alpha C  干擾素α10抗體

4--3-乙酮 80%大鼠絡(luò)氨(TYR)免疫試劑盒糖轉(zhuǎn)移25結(jié)構(gòu)域1/前膠原半糖轉(zhuǎn)移1抗體IFN gamma(F2E4)  γ-干擾素單克隆抗體

2--3- 99%大鼠卵清蛋白特異性IgG(OVA sIgG)免疫試劑盒谷氨酰酰水解抗體IFN gamma  干擾素-γ抗體

2-(2-吡酮-1-)-1,1,3,3-四脲四氟鹽  99%大鼠卵清蛋白特異性IgE(OVA sIgE)免疫試劑盒糖轉(zhuǎn)移25結(jié)構(gòu)域2/前膠原半糖轉(zhuǎn)移2抗體IFN gamma  干擾素-γ抗體

3,5-二芐 97%大鼠卵泡抑素(FS)免疫試劑盒糖轉(zhuǎn)移28家族1抗體IFITM1/CD225  干擾素誘導(dǎo)跨膜蛋白1抗體

D-2,4-二氨丁 99%大鼠卵脂膽固酰轉(zhuǎn)移(LCAT)免疫試劑盒糖轉(zhuǎn)移6結(jié)構(gòu)1抗體IFITM1/CD225  干擾素誘導(dǎo)跨膜蛋白1抗體

D-(-)-二乙酯 99%大鼠硫氧還蛋白還原(TrxR)免疫試劑盒膠質(zhì)瘤抑癌候選因2抗體IFI78/MX1  干擾素誘導(dǎo)蛋白P78抗體