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| 貨號 | GOY-01X0978 |
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細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
公司細胞現(xiàn)貨供應，質量有保證、*、實驗效果好，我司為您提供免費代測服務，同時提供最新價格、說明書、規(guī)格、用途、實驗原理等相關操作說明。
產品名稱 | 大鼠骨骼肌細胞 |
規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 |
分類 | 原代細胞 |
貨號 | GOY-01X0978 |
商品介紹：
名稱 大鼠骨骼肌細胞 2.組織來源：骨骼肌組織 3.產品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介： 大鼠骨骼肌細胞分離自四肢肌肉組織；骨骼肌又稱橫紋肌，肌肉中的一種，約占全身重量的40%。骨骼肌纖維為長柱形的多核細胞，肌膜的外面有基膜緊密貼附。屬于橫紋肌，橫紋肌還包括心肌與內臟橫紋肌，其中骨骼肌主要分布于四肢。每塊肌肉都是具有一定形態(tài)、結構和功能的器官，有豐富的血管、淋巴分布，在軀體神經支配下收縮或舒張，進行隨意運動。肌肉可根據(jù)共形狀、大小、位置、起止點、纖維方向和作用等命名。依形態(tài)命名的如斜方肌、菱形肌、三角肌、梨狀肌等。骨骼肌細胞呈纖維狀，不分支，有明顯橫紋，核很多，且都位于細胞膜下方。肌細胞內有許多沿細胞長軸平行排列的細絲狀肌原纖維。每一肌原纖維都有相間排列的明帶（Ⅰ帶）及暗帶（A帶）。明帶染色較淺，而暗帶染色較深。暗帶中間有一條較明亮的線稱H線。H線的中部有一M線。明帶中間，有一條較暗的線稱為Z線。兩個Z線之間的區(qū)段，叫做一個肌節(jié)。骨骼肌細胞也稱橫紋肌細胞，細胞呈纖維狀，不分支，有明顯橫紋，核很多，且都位于細胞膜下方，細胞多呈梭行，具有一定的方向性。骨骼肌細胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細胞貼壁伸展，細胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細胞匯合，多數(shù)細胞伸展呈長梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長，高低起伏；細胞密度低時，常交織成網(wǎng)狀；密度高時，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細胞生長較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學特征和生長特點。 5.方法簡介： ()實驗室分離的大鼠骨骼肌細胞采用膠原酶消化法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質量檢測： ()實驗室分離的大鼠骨骼肌細胞經α-Sarcometric actin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 包被條件PLL（0.1mg/ml） 培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產品貨號CM-R084 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態(tài)成纖維細胞樣 傳代特性可傳5代左右；3代以內狀態(tài)最佳 消化液0.25% 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
使用方法：
收到細胞后，請按照以下方法進行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時或者過夜，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 待細胞達到80%匯合時準備進行傳代培養(yǎng)。
3. 細胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次；
2) 添加0.125%消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中，37℃溫浴3min左右；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入*培養(yǎng)液終止消化；
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2或1:3等適當?shù)谋壤M行接種傳代，然后補充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL，放入37℃，5% CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4) 待細胞*貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。
培養(yǎng)操作：
1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
2 ug pYES2.0 pYES2.0 低溫運輸，-20℃保存 0.625-40 ng/mL 肌醇三(Inositol trisphosphate)ELISA試劑盒
0.5mL 動態(tài)濁度法內毒素定量試劑盒 6.25-400 nmol/L 吡啶(Pyridinoline)ELISA試劑盒
2 ug pET-17b pET-17b 低溫運輸，-20℃保存 78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human Carbonic anhydrase 1
LPM瓊脂添加劑 LPM Agar Ad
大鼠骨骼肌細胞Rabbit Anti-human IgM/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標記的兔抗人IgM 規(guī)格: 0.1ml
250mL 消化液(無EDTA) Trypsin Solution -20℃保存
Mouse Anti-human IgG/Cy5.5 Cy5.5標記的小鼠抗人IgG 規(guī)格: 0.1ml
CDC34/UBC3 細胞周期調控因子34 規(guī)格: 0.1ml
PAP2c/AP2-gamma 磷脂酸磷酸2C抗體 規(guī)格: 0.1mlphospho-Crk p38 (Tyr221) 磷酸化Crk p38抗體 規(guī)格: 0.1ml
KNL2/C14orf106 14號染色體開放閱讀框106抗體 規(guī)格: 0.2mlRabbit Anti-rat IgM/Cy7 Cy7標記的兔抗大鼠IgM 規(guī)格: 0.1ml
Rabbit Anti-mouse IgM/FITC FITC標記的兔抗小鼠IgM 規(guī)格: 0.3ml
PRKD1/PKC mu 蛋白激C mu型抗體 規(guī)格: 0.2mlphospho-PAK1+PAK2+PAK3 (Ser141) 磷酸化p21激活激1/2/3抗體 規(guī)格: 0.1ml
Goat Anti-Bovine IgG/Bio 標記的羊抗牛IgG 規(guī)格: 0.1ml
2 ug pSIH1-H1-CoGFP pSIH1-H1-CoGFP 低溫運輸，-20℃保存
硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基(顆粒) 250g
2 ug pGN pGN 低溫運輸，-20℃保存
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