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貨號(hào)	GOY-01S6974

商品屬性：

產(chǎn)品名稱	葡萄糖6磷酸酶（G6P)微量法檢測(cè)試劑盒
規(guī)格	100管/96樣
檢測(cè)方法	微量法
貨號(hào)	GOY-01S6974

商品介紹：

測(cè)定意義

葡萄糖-6-磷酸酶（(glucose 6 phosphatase，G6Pase，EC 3.1.3.9）廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和細(xì)胞中，是糖異生過程水解葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖的限制酶，在保證血糖的動(dòng)態(tài)平衡方面起著重要的作用。

測(cè)定原理：

G6P催化葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖，變旋酶和葡萄糖脫氫酶進(jìn)一步依次催化NAD+還原生成NADH，在340nm下測(cè)定NADH生成速率，即可反映G6P活性。

需自備的儀器和用品：

分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

實(shí)驗(yàn)方法學(xué)：

一、肝素的配制：

市售肝素凍干粉140單位/mg，1克瓶裝，每瓶140，000單位，稱取0.1克肝素凍干粉，加生理鹽水5ml，配成2800單位/ml。取50～100μl濕潤(rùn)管壁，可抗凝人血3～5ml，血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固，所以最好更濃一些?？梢匀?/span>0.1克肝素凍干粉，加3ml生理鹽水溶解后，取50～100μl,可抗凝鼠血2～4ml。

肝素抗凝管的制備：取0.1克肝素凍干粉，加2.5ml生理鹽水。取100μl～150μl滴入塑料或玻璃管中，濕潤(rùn)管壁，低于80℃小烤箱中（可以用烤面包的小烤箱），橫向轉(zhuǎn)動(dòng)，每隔5～10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次，直至干燥后放入4℃保存，可使2～5ml血液不凝固。

二、血液樣本的收集：

全血根據(jù)收集的條件，分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí)，不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清；抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。

1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1～2小時(shí)，直接低速離心分離出血清待用或保存。

2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血，輕輕顛倒充分抗凝后，可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征，選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA。

選擇抗凝的注意點(diǎn)：

①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致，同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;

②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;

③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多（1ml抗凝全血能分離出0.4～0.5ml血漿）;

④、抗凝收集的血漿冷凍保存后，解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁后

用于測(cè)定。

D-蘋果酸 99%聚乙二單甲均分子量750 Anti-CBP/FITC 熒光素標(biāo)記CREB結(jié)合蛋白抗體IgG

DL-正纈 99%聚乙二單甲平均分子量500Anti-CBX3/FITC 熒光素標(biāo)記染色盒同源物3抗體IgG

D-正纈 99%壬基酚聚氧乙烯(NP 40) ~10% in H2OAnti-CBX5/FITC 熒光素標(biāo)記CBX5抗體IgG

L-正纈 99% CPAnti-Cbx8/FITC 熒光素標(biāo)記染色質(zhì)結(jié)合蛋白Cbx8抗體IgG

D-苯甲酯鹽酸鹽 98%99%Anti-CC16/FITC 熒光素標(biāo)記克拉拉蛋白(Clara分泌蛋白)抗體IgG

D-苯甘乙酯鹽酸鹽 99% 99.8%，藥用級(jí)Anti-CCK8/FITC 熒光素標(biāo)記膽囊收縮素/縮膽囊素抗體(八肽)

DL-脯 99%聚乙二 average Mn 200Anti-CCL1/I-309/TCA3/FITC 熒光素標(biāo)記嗜酸粒趨化蛋白CCL1抗體IgG

L-焦谷 97%聚乙二 average Mn 1000Anti-CCL3/MIP-1 Alpha/FITC 熒光素標(biāo)記巨噬炎性蛋白1α抗體IgG

葡萄糖6磷酸酶（G6P)微量法檢測(cè)試劑盒小鼠胰島素原(PI)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

大鼠25羥基D3(25 HVD3)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

大鼠促胰液素/胰泌素(Sct)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

大鼠胞漿型磷脂A2(cPLA2)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

小鼠肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白B(SP-B)免疫試劑盒*直銷

大鼠幽門螺旋菌IgG(Hp-IgG)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

大鼠24S-羥化(CYP46)免疫試劑盒*直銷

大腸桿菌宿主殘留蛋白(E.coli P)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

犬血纖蛋白原(Fbg)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

單絲蛋白激1(LIMK1)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

操作步驟:

實(shí)驗(yàn)開始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時(shí)，均需混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量，如樣品濃度過高時(shí)，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍，計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

1. 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100μl（在使用前一小時(shí)內(nèi)配制），酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。

3. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

4. 每孔加檢測(cè)溶液B工作液（同檢測(cè)A工作液） 100μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。

5. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

6. 依序每孔加底物溶液90μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

7. 依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。

8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度（OD值）。