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菌種的培養(yǎng)：

1、菌種是指食用菌菌絲體及其生長基質(zhì)組成的繁殖材料。菌種分為母種（一級種）、原種（二級種）和栽培種（三級種）三級。工業(yè)發(fā)酵的有用菌種，其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復(fù)篩。

2、挑選具有某種能力的有用菌種，也稱種子制備，是指菌種在一定條件下，經(jīng)過擴大培養(yǎng)成為具有一定數(shù)量和質(zhì)量的純生產(chǎn)菌種的制備過程。以作接入發(fā)酵罐中進一步擴大菌體量及合成產(chǎn)物之用。

3、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備 菌種制備。

4、保存在沙土管或冷凍管中的生產(chǎn)菌種，用無菌手續(xù)挑取少許，接入瓊脂斜面培養(yǎng)基上，在25℃（或較高溫度）下培養(yǎng)5～7天（或較長時間。所得孢子還需進一步用較大表面積的固體培養(yǎng)基以獲得更多孢子（對于霉菌類孢子制備，多數(shù)采用大米、小米之類的天然培養(yǎng)基）。

5、將培養(yǎng)成熟的斜面孢子制成懸浮液，接種到扁瓶固體培養(yǎng)基上，于25～28℃培養(yǎng)14天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在生產(chǎn)上延續(xù)使用半年左右。

6、如果有些生產(chǎn)菌種不產(chǎn)孢子，如赤霉素產(chǎn)生菌或產(chǎn)孢子不多的，則可采用搖瓶液體培養(yǎng)制得菌絲體，作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發(fā)芽、生長、繁殖成大量菌體。其中的培養(yǎng)基組分應(yīng)是易于被菌體利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米漿），及無機鹽(如磷酸鹽)等。作為發(fā)酵罐的種子應(yīng)生命力旺盛、染色深、菌絲粗壯，無雜菌及異常菌體。接種量一般在10%～20%。

保存方法：

傳代保存法：培養(yǎng)基的濃度不宜過高，營養(yǎng)成分不宜過于豐富，尤其是碳水化合物的濃度應(yīng)在可能的范圍內(nèi)盡量降低。培養(yǎng)溫度通常以稍低于最適生長溫度為好。若為產(chǎn)酸菌種，則應(yīng)在培養(yǎng)基中添加少量碳酸鈣 [3] 。

液體石蠟覆蓋保存法：該法較前一種方法保存菌種的時間更長，適用于霉菌、酵母菌、放線菌及需氧細菌等的保存。

懸液保存法：

① 蒸餾水保存法：適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線菌，將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數(shù)年。本法應(yīng)注意避免水分的蒸發(fā)。

② 糖液保存法：適用于酵母菌，如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗處保存，可長達10年。除此之外，也可使用緩沖液或食鹽水等進行保存。

載體保存法：①土壤保存法；②砂土保存法；③硅膠保存法；④磁珠保存法；⑤麩皮保存法；⑥紙片(濾紙)保存法。

常用的冷凍保存法：

① 低溫冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃)：低溫冷凍保存時使用螺旋口試管較為方便，也可在棉塞試管外包裹塑料薄膜。保存時菌液加量不宜過多，有些可添加保護劑。此外，也可用φ5mm的玻璃珠來吸附菌液，然后把玻璃珠置于塑料容器內(nèi)，再放入低溫冰箱內(nèi)進行保存的。

② 干冰保存法(-70℃左右)：即將菌種管插入干冰內(nèi)，再置于冰箱內(nèi)進行冷凍保存。

③ 液氮保存法(-196℃)：是適用范圍*的微生物保存法。

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嵴鏈球菌洋薊素 分析標準品，95%小鼠B12(VB12)免疫試劑盒載脂蛋白樣蛋白6抗體TM4SF3  TM4SF3蛋白抗體

吳茱萸內(nèi)酯 分析標準品，>98%(HPLC)小鼠A(VA)免疫試劑盒凋亡相關(guān)蛋白TGFb信號抗體TLX3  T白血病同源盒蛋白3抗體

吳茱萸內(nèi)酯 97.5%(HPLC)小鼠微管相關(guān)蛋白1A/1B輕鏈3B(MAP1LC3B)免疫試劑盒A2LD1蛋白抗體TLS/FUS  粘液樣脂肪肉瘤蛋白FUS1抗體

羥酪  98%小鼠微管蛋白β3(TUBB3)免疫試劑盒α1,4-N-乙酰葡糖轉(zhuǎn)移α4Gn-T抗體TLR9/CD289  Toll樣受體9抗體

常春藤皂苷元 分析標準品，≥98%小鼠網(wǎng)膜素(omentin)免疫試劑盒芳香乙酰脫乙酰抗體TLR7  Toll樣受體7抗體

A  分析標準品，≥98%小鼠晚期糖化終末產(chǎn)物(AGEs)免疫試劑盒芳香乙酰脫乙酰樣蛋白4抗體TLR6/CD286  Toll樣受體6抗體

素 分析標準品，≥98%小鼠脫氧膠原吡交聯(lián)(DPD)免疫試劑盒氨乙二半脫氫泛酰巰乙轉(zhuǎn)移抗體TLR5  Toll樣受體5抗體

鹽石蒜堿 96%(HPLC)小鼠脫氫表雄酮硫酯(DHEA-S)免疫試劑盒賴氨酮戊二還原抗體TLR4/CD284  Toll樣受體4抗體

鹽石蒜堿 分析標準品，≥98%小鼠脫氫表雄酮(DHEA)免疫試劑盒錨蛋白重復(fù)域6抗體TLR3  Toll樣受體3抗體

羽扇豆 分析標準品，≥98%小鼠褪黑素(MT)免疫試劑盒精氨2抗體TLR2/CD282  Toll樣受體2抗體

羅漢果苷V  分析標準品，≥98%小鼠突觸融合蛋白2(STX2)免疫試劑盒固酮還原家族1成員C3抗體TLR11  Toll樣受體11抗體

羅漢果苷V  98%小鼠突觸融合蛋白1A(STX1A)免疫試劑盒促皮質(zhì)激素受體TLR1  Toll樣受體1抗體

橄欖苦苷  分析標準品，≥98%(HPLC)小鼠透明質(zhì)結(jié)合蛋白(HABP)免疫試劑盒褐黑素相關(guān)蛋白ART抗體TLK2  絲氨/蘇氨激TLK2抗體

安石榴苷  98%小鼠透明質(zhì)(HA)免疫試劑盒皮質(zhì)線粒體鐵氧還蛋白抗體TLK1  調(diào)節(jié)染色體組裝激1抗體

紫丁香苷 分析標準品，≥98%小鼠銅藍蛋白(CP/CER)免疫試劑盒Allgrove綜合征相關(guān)蛋白抗體TKTL1  酮移換樣蛋白1抗體

微生物菌種的培養(yǎng)：

⒈ 孢子制備

⑴ 孢子的制備

一般采用瓊脂斜面培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中含有一些適合產(chǎn)孢子的營養(yǎng)成分，如麩皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些無機鹽等。碳源和氮源不要太豐富(碳源約為1％，氮源不超過0.5％)，碳源豐富容易造成生理酸性的營養(yǎng)環(huán)境，不利于形成，氮源豐富則有利于菌絲繁殖而不利于孢子形成。一般情況下，干燥和限制營養(yǎng)可直接或間接誘導(dǎo)孢子形成。面的培養(yǎng)溫度大多數(shù)為28 ℃，少數(shù)為37 ℃，培養(yǎng)時間為5～14天。

⑵ 霉菌孢子的制備　

霉菌的孢子培養(yǎng)，一般以大米、小米、玉米、麩皮、麥粒等天然農(nóng)產(chǎn)品為培養(yǎng)基。這是由于這些農(nóng)產(chǎn)品中的營養(yǎng)成分較適合霉菌的孢子繁殖，而且這類培養(yǎng)基的表面積較大，可獲得大量的孢子。霉菌的培養(yǎng)一般為25～28 ℃，培養(yǎng)時間為4～14天。

⒉ 種子制備

⑴ 搖瓶種子制備　

搖瓶種子進罐，常采用母瓶、子瓶兩級培養(yǎng)，有時母瓶種子也可以直接進罐。種子培養(yǎng)基要求比較豐富和*，并易被菌體分解利用，氮源豐富有利于菌絲生長。原則上各種營養(yǎng)成分不宜過濃，子瓶培養(yǎng)基濃度比母瓶略高，更接近種子罐的培養(yǎng)基配方。

⑵ 種子罐種子制備　

種子罐種子制備的工藝過程，因菌種不同而異，一般可分為一級種子、二級種子和三級種子的制備。孢子(或搖瓶菌絲)被接入到體積較小的種子罐中，經(jīng)培養(yǎng)后形成大量的菌絲，這樣的種子稱為一級種子，把一級種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵，稱為二級發(fā)酵。如果將一級種子接入體積較大的種子罐內(nèi)，經(jīng)過培養(yǎng)形成更多的菌絲，這樣制備的種子稱為二級種子，將二級種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵，稱為三級發(fā)酵。同樣道理，使用三級種子的發(fā)酵，稱為四級發(fā)酵。