當(dāng)前位置:上海谷研實(shí)業(yè)有限公司>>生化檢測試劑盒>>土壤系列>> 土壤酸性磷酸酶(SACP)熒光法檢測試劑盒
貨號 | GOY-01S6838 |
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商品屬性:
產(chǎn)品名稱 | |
規(guī)格 | 100管/96樣 |
檢測方法 | 熒光法 |
貨號 | GOY-01S6838 |
商品介紹:
測定意義
土壤磷酸酶是一類催化土壤有機(jī)磷化合物礦化的酶,其活性的高低直接影響著土壤中有機(jī)磷的分解轉(zhuǎn)化及其生物有效性,是評價土壤磷素生物轉(zhuǎn)化方向與強(qiáng)度的指標(biāo)。土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH顯著影響。通常按照其最適pH范圍,分為堿性、中性和酸性三種類型磷酸酶。
測定原理:
堿性環(huán)境中,S-AKP/ALP催化磷酸苯二鈉水解生成和,通過測定酚的生成量即可計算出S-AKP/ALP活性。
自備儀器和用品:
紫外分光光度計/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板、臺式離心機(jī)、37℃恒溫培養(yǎng)箱、分析天平、可調(diào)式移液器、冰、蒸餾水、無水乙醇和甲苯。
實(shí)驗(yàn)方法學(xué):
一、肝素的配制: 市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些。可以取0.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。 肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動,每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。 | 二、血液樣本的收集: 全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時,不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。 1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時,直接低速離心分離出血清待用或保存。 2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA。 |
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測定。
橡膠PTFE墊片,配套120ZSS棕色瓶,φ20mm*1.4mm赫斯特?zé)晒馊剂希?3342 98%Anti-DCN/FITC 熒光素標(biāo)記抗核心蛋白聚糖抗體IgG
中空純四氟塞,配套120ZSS玻璃瓶,φ18*18胞內(nèi)鈣熒光探針BAPTA, AM 95%Anti-DCP/FITC 熒光素標(biāo)記異常原/脫-γ-羧基原抗體IgG
橡膠覆PTFE墊片,匹配30Zss黑色低蓋,φ18*1.52',7'-二-(2-羧乙基)-5(6)-羧基熒光素 90%Anti-DCP /HRP 辣根過氧化物標(biāo)記異常原/脫-γ-羧基原抗體IgG
橡膠覆PTFE墊片,匹配500MLZPA棕色瓶低蓋,φ25.5*1.52',7'-二-(2-羧乙基)-5(6)-羧基熒光素乙酰甲酯1 mg/ml,溶劑:DMSOAnti-DCX/FITC 熒光素標(biāo)記雙皮質(zhì)素抗體IgG
500ZPA四氟柱塞,匹配500MLZPA棕色瓶,Ф23*27.7 ,2',7'-二-(2-羧乙基)-5(6)-羧基熒光素乙酰甲酯Mixed isomersAnti-Phospho-Doublecortin (Ser297) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠等化雙皮質(zhì)素抗體IgG
30ZSS中空四氟塞,φ16*17.36-羧基熒光素 95%Anti-D-DIMER/FITC 熒光素標(biāo)記交聯(lián)纖維蛋白二聚體抗體IgG
PTFE墊片,匹配2ml棕色螺紋玻璃瓶和瓶蓋,φ9*1.55-羧基熒光素 95%Anti-DDAH-II /FITC 熒光素標(biāo)記雙甲基精水解2抗體IgG
PTFE墊片,匹配3ml棕色螺紋玻璃瓶和瓶蓋,φ11.8*1.55-羧基四甲基羅丹明 95%Anti-DDB1/FITC 熒光素標(biāo)記損傷DNA結(jié)合蛋白1抗體IgG
土壤酸性磷酸酶(SACP)熒光法檢測試劑盒大鼠泛素激活(E1/UBAE)免疫試劑盒*直銷
UV切除修復(fù)蛋白RAD23 同源物A(RAD23A)免疫試劑盒*直銷
抗神經(jīng)元核抗體2型/抗Ri抗體(ANNA-2/Ri)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
醛糖還原(AR)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
大鼠亮氨酰氨基肽(LAP)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
17羥皮質(zhì)類固醇(17-OHCS)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝
牛胰高血糖素樣肽1(GLP-1)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
強(qiáng)啡肽(Dyn)免疫試劑盒*直銷
網(wǎng)膜素(omentin)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
小鼠αL艾杜糖苷酸(IDUA)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝
操作步驟:
實(shí)驗(yàn)開始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測樣品含量,如樣品濃度過高時,應(yīng)對樣品進(jìn)行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍,計算時再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
1. 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl(在使用前一小時內(nèi)配制),酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。
3. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
4. 每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液) 100μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。
5. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
7. 依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng),此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。
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