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菌種的培養(yǎng):
1、菌種是指食用菌菌絲體及其生長基質組成的繁殖材料。菌種分為母種(一級種)、原種(二級種)和栽培種(三級種)三級。工業(yè)發(fā)酵的有用菌種,其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復篩。
2、挑選具有某種能力的有用菌種,也稱種子制備,是指菌種在一定條件下,經過擴大培養(yǎng)成為具有一定數量和質量的純生產菌種的制備過程。以作接入發(fā)酵罐中進一步擴大菌體量及合成產物之用。
3、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備 菌種制備。
4、保存在沙土管或冷凍管中的生產菌種,用無菌手續(xù)挑取少許,接入瓊脂斜面培養(yǎng)基上,在25℃(或較高溫度)下培養(yǎng)5~7天(或較長時間。所得孢子還需進一步用較大表面積的固體培養(yǎng)基以獲得更多孢子(對于霉菌類孢子制備,多數采用大米、小米之類的天然培養(yǎng)基)。
5、將培養(yǎng)成熟的斜面孢子制成懸浮液,接種到扁瓶固體培養(yǎng)基上,于25~28℃培養(yǎng)14天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入 4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在生產上延續(xù)使用半年左右。
6、如果有些生產菌種不產孢子,如赤霉素產生菌或產孢子不多的,則可采用搖瓶液體培養(yǎng)制得菌絲體,作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發(fā)芽、生長、繁殖成大量菌體。其中的培養(yǎng)基組分應是易于被菌體利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米漿),及無機鹽(如磷酸鹽)等。作為發(fā)酵罐的種子應生命力旺盛、染色深、菌絲粗壯,無雜菌及異常菌體。接種量一般在10%~20%。
保存方法:
傳代保存法:培養(yǎng)基的濃度不宜過高,營養(yǎng)成分不宜過于豐富,尤其是碳水化合物的濃度應在可能的范圍內盡量降低。培養(yǎng)溫度通常以稍低于最適生長溫度為好。若為產酸菌種,則應在培養(yǎng)基中添加少量碳酸鈣 [3] 。
液體石蠟覆蓋保存法:該法較前一種方法保存菌種的時間更長,適用于霉菌、酵母菌、放線菌及需氧細菌等的保存。
懸液保存法:
① 蒸餾水保存法:適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線菌,將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數年。本法應注意避免水分的蒸發(fā)。
② 糖液保存法:適用于酵母菌,如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中,然后于冷暗處保存,可長達10年。除此之外,也可使用緩沖液或食鹽水等進行保存。
載體保存法:①土壤保存法;②砂土保存法;③硅膠保存法;④磁珠保存法;⑤麩皮保存法;⑥紙片(濾紙)保存法。
常用的冷凍保存法:
① 低溫冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃):低溫冷凍保存時使用螺旋口試管較為方便,也可在棉塞試管外包裹塑料薄膜。保存時菌液加量不宜過多,有些可添加保護劑。此外,也可用φ5mm的玻璃珠來吸附菌液,然后把玻璃珠置于塑料容器內,再放入低溫冰箱內進行保存的。
② 干冰保存法(-70℃左右):即將菌種管插入干冰內,再置于冰箱內進行冷凍保存。
③ 液氮保存法(-196℃):是適用范圍*的微生物保存法。
人α2抗纖溶Bacillus circulans角蛋白18-M30檢測試劑盒
人N-乙酰-β-D-葡萄糖苷Bacillus circulans角蛋白19檢測試劑盒
人L苯解氨Bacillus circulans角蛋白21-1片段檢測試劑盒
人5核苷酸Bacillus circulans色素C檢測試劑盒
人1,3-βD葡葡糖苷Bacillus circulans色素C氧化檢測試劑盒
人肌酸激Bacillus clarkii色素P450檢測試劑盒
人靶向核糖核酸Bacillus clausii色素P4501A1檢測試劑盒
人蛋白激CBacillus coagulans色素P4501A2檢測試劑盒
Sphingomonasyantingensis黃 CP(劇品)小鼠纖連蛋白(FN)免疫試劑盒腺苷活化蛋白激γ3抗體TNFR1/TNF Receptor I 腫瘤壞死因子受體1抗體
黃 GR(劇品)小鼠細小病(PV)抗體(IgG)免疫試劑盒腺苷單活化蛋白激β2抗體TNFC/lymphotoxin Beta 腫瘤壞死因子C/淋巴素β抗體
過氧乙 AR,18-20%小鼠周期素D3(Cyclin-D3)免疫試劑盒化周期末期促進復合蛋白APC1抗體TNF-alpha(1F6) 腫瘤壞死因子-α單克隆抗體
過氧乙 21-25%小鼠周期素D2(Cyclin-D2)免疫試劑盒周期末期促進復合蛋白APC1抗體TNF-alpha 腫瘤壞死因子-α抗體
過氧乙 26-30%小鼠周期素D1(Cyclin-D1)免疫試劑盒化蛋白激B2抗體TNFAIP8 腫瘤壞死因子α誘導蛋白8抗體
過氧乙 31-35%小鼠因子信號轉導抑制因子3(SOCS-3)免疫試劑盒化鐵蛋白Fe65抗體TNFAIP5/Pentraxin 3 腫瘤壞死因子α誘導蛋白5
過氧乙 36-40%小鼠因子信號轉導抑制因子1(SOCS-1)免疫試劑盒化鐵蛋白Fe65抗體TNFAIP3 interacting protein 3/ABIN3 腫瘤壞死因子α誘導相互作用蛋白3抗體
過氧乙 41-45%小鼠外信號調節(jié)激(ERK)免疫試劑盒化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體TNFAIP3 腫瘤壞死因子α誘導蛋白3抗體
過氧乙 46-50%小鼠色素C(Cyt-C)免疫試劑盒化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體TNFAIP2 腫瘤壞死因子誘導蛋白2(TNFα-IP 2)抗體
過氧乙 高純度,醫(yī)用級,5%(1Gal/PE)小鼠角蛋白21-1片段(CYFRA21-1)免疫試劑盒化活化復制因子2抗體TNFAIP1 腫瘤壞死因子α誘導蛋白1抗體
過氧乙 15-17%小鼠角蛋白18-M65(CK 18-M65)免疫試劑盒化活化復制因子2抗體TNF β 腫瘤壞死因子-β抗體
發(fā)煙硫 AR小鼠角蛋白18-M30(CK 18-M30)免疫試劑盒化周期末期促進復合蛋白APC1抗體TNF alpha 腫瘤壞死因子-α/TNFα抗體
發(fā)煙硫 65%小鼠間粘附分子3(ICAM-3/CD50)免疫試劑盒發(fā)育分化增強因子1抗體TNF alpha 腫瘤壞死因子-α/TNFα抗體
結晶四化錫 AR,99.0% 小鼠間粘附分子2(ICAM-2/CD102)免疫試劑盒化發(fā)育分化增強因子1抗體TMUB1 跨膜和泛素樣結構域蛋白1抗體
結晶四化錫 99.995% metals basis小鼠間粘附分子1(ICAM-1/CD54)免疫試劑盒蛋白激B3TMS1/ASC 凋亡相關斑點樣蛋白ASC抗體
微生物菌種的培養(yǎng):
⒈ 孢子制備
⑴ 孢子的制備
一般采用瓊脂斜面培養(yǎng)基,培養(yǎng)基中含有一些適合產孢子的營養(yǎng)成分,如麩皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些無機鹽等。碳源和氮源不要太豐富(碳源約為1%,氮源不超過0.5%),碳源豐富容易造成生理酸性的營養(yǎng)環(huán)境,不利于形成,氮源豐富則有利于菌絲繁殖而不利于孢子形成。一般情況下,干燥和限制營養(yǎng)可直接或間接誘導孢子形成。面的培養(yǎng)溫度大多數為28 ℃,少數為37 ℃,培養(yǎng)時間為5~14天。
⑵ 霉菌孢子的制備
霉菌的孢子培養(yǎng),一般以大米、小米、玉米、麩皮、麥粒等天然農產品為培養(yǎng)基。這是由于這些農產品中的營養(yǎng)成分較適合霉菌的孢子繁殖,而且這類培養(yǎng)基的表面積較大,可獲得大量的孢子。霉菌的培養(yǎng)一般為25~28 ℃,培養(yǎng)時間為4~14天。
⒉ 種子制備
⑴ 搖瓶種子制備
搖瓶種子進罐,常采用母瓶、子瓶兩級培養(yǎng),有時母瓶種子也可以直接進罐。種子培養(yǎng)基要求比較豐富和*,并易被菌體分解利用,氮源豐富有利于菌絲生長。原則上各種營養(yǎng)成分不宜過濃,子瓶培養(yǎng)基濃度比母瓶略高,更接近種子罐的培養(yǎng)基配方。
⑵ 種子罐種子制備
種子罐種子制備的工藝過程,因菌種不同而異,一般可分為一級種子、二級種子和三級種子的制備。孢子(或搖瓶菌絲)被接入到體積較小的種子罐中,經培養(yǎng)后形成大量的菌絲,這樣的種子稱為一級種子,把一級種子轉入發(fā)酵罐內發(fā)酵,稱為二級發(fā)酵。如果將一級種子接入體積較大的種子罐內,經過培養(yǎng)形成更多的菌絲,這樣制備的種子稱為二級種子,將二級種子轉入發(fā)酵罐內發(fā)酵,稱為三級發(fā)酵。同樣道理,使用三級種子的發(fā)酵,稱為四級發(fā)酵。
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