實(shí)驗(yàn)操作步驟：  

a．采用認(rèn)可的方案處死嚙齒動物。

b．立即在無菌超凈臺內(nèi)用70％乙醇擦洗整個動物。

c．用無菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用無菌鑷子將皮膚扯向后腿。

d．用另一無菌的剪刀和鑷子切開腹部，取出含有胚胎的子宮，置于無菌的培養(yǎng)皿上。

e．剔除胚胎周圍的包膜，將胚胎放于無菌的含有無菌PBS的100ml燒杯中。

f．漂洗胚胎，去掉PBS。繼續(xù)用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮為止。

產(chǎn)品屬性：

產(chǎn)品介紹：

名稱    大鼠腦動脈血管內(nèi)皮細(xì)胞

2.組織來源：腦動脈組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4.細(xì)胞簡介：

大鼠腦動脈血管內(nèi)皮細(xì)胞分離自腦動脈組織；腦動脈有成對的頸內(nèi)動脈和椎動脈互相銜接成動脈循環(huán)；靜脈系多不與同名動脈拌行，所收集的靜脈血先進(jìn)入靜脈竇再匯入頸內(nèi)靜脈；各級靜脈都沒有瓣膜，它包括腦的動脈系統(tǒng)和腦的靜脈系統(tǒng)。腦動脈血管內(nèi)皮細(xì)胞主要功能：①維持血管內(nèi)外的動態(tài)平衡；②合成和分泌細(xì)胞因子和介質(zhì)；③維持凝血和纖溶的動態(tài)平衡。

5.方法簡介：

()實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠腦動脈血管內(nèi)皮細(xì)胞采用膠原酶-中性混合消化法并通過內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質(zhì)量檢測：

()實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠腦動脈血管內(nèi)皮細(xì)胞經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息：

包被條件PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

產(chǎn)品貨號CM-R100

換液頻率每2-3天換液一次

生長特性貼壁

細(xì)胞形態(tài)內(nèi)皮細(xì)胞樣

傳代特性可傳2-3代

消化液0.25%

培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5%

處理方法：

收到細(xì)胞后，檢查外包裝是否完整，細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好。如有破損漏液等問題，請即時聯(lián)系。并進(jìn)行以下操作：

1. 75%酒精棉球擦拭T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶外部。

2. 將細(xì)胞放入37度培養(yǎng)箱中預(yù)溫3-4小時后再做處理，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

3. 預(yù)熱培養(yǎng)基（含10%胎牛血清，1%雙抗）。

4. 顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照保存（40×,100×,200×各一張）。

5. ①若細(xì)胞密度較小，無菌操作，去掉培養(yǎng)基。每瓶添加第四步中準(zhǔn)備的5-6ml培養(yǎng)基。放到37度培養(yǎng)箱培養(yǎng)。待細(xì)胞密度達(dá)到80%以上，進(jìn)行傳代。

注意事項：

1. 正式實(shí)驗(yàn)前請選取幾個樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，取得最佳實(shí)驗(yàn)效果。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，

避免開蓋時試劑損失。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。

4. 樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導(dǎo)致錯誤的結(jié)果。

5. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗

并*清除殘留清潔劑。

6. 實(shí)驗(yàn)后完成后所有樣品及接觸過的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理。

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：

1.研究的對象是活細(xì)胞

在實(shí)驗(yàn)過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。

3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性

通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。

4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄

采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備

記錄方式可采用攝影照片、縮時電影、電視等多種手段。

5.研究的范圍比較廣泛

應(yīng)用的學(xué)科領(lǐng)域較為寬廣，如細(xì)胞學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、生物化學(xué)、遺傳學(xué)、分子生物學(xué)等；

適用的對象范圍廣，從低等動物到高等動物，一種動物的不同年齡階段以及不同組織，都可進(jìn)行有針對性的研究。

6.研究的費(fèi)用相對較經(jīng)濟(jì)

可提供大量、同一時期、重復(fù)性好的、生物學(xué)性狀相似的實(shí)驗(yàn)對象。

2 ug pYES6/CT pYES6/CT 低溫運(yùn)輸，-20℃保存 78-5000 pg/mL 普氏立克次體(RP)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)

50次 λ噬菌體DNAout   0.312-20 ng/mL 人線粒體胍丁胺(Agmatinase, mitochondrial)ELISA試劑盒

2 ug pAAV-helper pAAV-helper 低溫運(yùn)輸，-20℃保存 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human T-cell surface glycoprotei

大鼠腦動脈血管內(nèi)皮細(xì)胞2 ug pFP93 pFP93 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

PSGL-1/CD162  P選擇素糖蛋白配體1抗體 規(guī)格: 0.1ml

100mL RNase-Free Potassium Chloride Solution（無RNase的溶液），1M RNase-Free Potassium Chloride Solution，1M 常溫保存

100mL DNEDTA溶液,0.5M,PH8.01   

Integrin alpha 2b/CD41  小板膜糖蛋白ⅡbⅢa抗體 規(guī)格: 0.1mlCA13  碳酸酐 規(guī)格: 0.2ml

50T 血清型耶爾森氏菌ail基因常規(guī)PCR檢測試劑盒  低溫運(yùn)輸，-20℃保存

1 管 TG1大腸桿菌 TG1 E.coli Strain -80℃保存

李斯特氏菌顯色培養(yǎng)基 Listera Chromogenic Medium 1000(ML)

葡萄球菌選擇性瓊脂110 Staphylococcus Selective Agar 10 250g

5mL CCK-8細(xì)胞增殖及毒性檢測試劑盒 Cell Counting Kit-8 4℃避光保存一年有效，-20℃避光保存兩年有效

2 ug pSilencer 5.1-U6 Retro pSilencer 5.1-U6 Retro 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

C17orf49  17號染色體開放閱讀框49抗體 規(guī)格: 0.2mlRabbit Anti-chicken IgM/APC  APC標(biāo)記的兔抗雞IgM 規(guī)格: 0.1ml