實(shí)驗(yàn)操作步驟：  

a．采用認(rèn)可的方案處死嚙齒動(dòng)物。

b．立即在無(wú)菌超凈臺(tái)內(nèi)用70％乙醇擦洗整個(gè)動(dòng)物。

c．用無(wú)菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用無(wú)菌鑷子將皮膚扯向后腿。

d．用另一無(wú)菌的剪刀和鑷子切開腹部，取出含有胚胎的子宮，置于無(wú)菌的培養(yǎng)皿上。

e．剔除胚胎周圍的包膜，將胚胎放于無(wú)菌的含有無(wú)菌PBS的100ml燒杯中。

f．漂洗胚胎，去掉PBS。繼續(xù)用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮為止。

產(chǎn)品屬性：

產(chǎn)品介紹：

名稱    真皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞

2.組織來(lái)源：皮膚組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4.細(xì)胞簡(jiǎn)介：

人真皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞分離自真皮組織；真皮，位于表皮深層，向下與皮下組織相連，真皮結(jié)締組織的膠原纖維和彈性纖維互相交織在一起，埋于基質(zhì)內(nèi)。其內(nèi)分布著各種結(jié)締組織細(xì)胞和大量的膠原纖維彈性纖維，使皮膚既有彈性，又有韌性。其由兩層組成——乳頭層與網(wǎng)狀層。真皮的結(jié)構(gòu)組成是膠原蛋白、彈性纖維以及基質(zhì)。微血管內(nèi)皮細(xì)胞（MEC）在炎癥反應(yīng)、腫瘤生長(zhǎng)、創(chuàng)面愈合過(guò)程中起著非常重要的作用。在創(chuàng)面愈合研究領(lǐng)域，由于表皮細(xì)胞、真皮成纖維細(xì)胞體外培養(yǎng)技術(shù)的成熟，人們對(duì)這兩種細(xì)胞早已進(jìn)行了大量深入的研究。與之相比，對(duì)參與創(chuàng)面愈合過(guò)程的另一種主要細(xì)胞——真皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞，則因其體外分離培養(yǎng)技術(shù)的困難而使相關(guān)的研究受限。

5.方法簡(jiǎn)介：

()實(shí)驗(yàn)室分離的人真皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞采用膠原酶-中性混合消化法結(jié)合密度梯度離心法、最后通過(guò)內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質(zhì)量檢測(cè)：

()實(shí)驗(yàn)室分離的人真皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息：

包被條件PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養(yǎng)基含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

產(chǎn)品貨號(hào)CM-H098

換液頻率每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性貼壁

細(xì)胞形態(tài)內(nèi)皮細(xì)胞樣

傳代特性可傳2-3代

消化液0.25%

培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5%

處理方法：

收到細(xì)胞后，檢查外包裝是否完整，細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好。如有破損漏液等問(wèn)題，請(qǐng)即時(shí)聯(lián)系。并進(jìn)行以下操作：

1. 75%酒精棉球擦拭T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶外部。

2. 將細(xì)胞放入37度培養(yǎng)箱中預(yù)溫3-4小時(shí)后再做處理，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

3. 預(yù)熱培養(yǎng)基（含10%胎牛血清，1%雙抗）。

4. 顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照保存（40×,100×,200×各一張）。

5. ①若細(xì)胞密度較小，無(wú)菌操作，去掉培養(yǎng)基。每瓶添加第四步中準(zhǔn)備的5-6ml培養(yǎng)基。放到37度培養(yǎng)箱培養(yǎng)。待細(xì)胞密度達(dá)到80%以上，進(jìn)行傳代。

注意事項(xiàng)：

1. 正式實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)選取幾個(gè)樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，取得最佳實(shí)驗(yàn)效果。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，

避免開蓋時(shí)試劑損失。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會(huì)影響使用效果。

4. 樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。

5. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗

并*清除殘留清潔劑。

6. 實(shí)驗(yàn)后完成后所有樣品及接觸過(guò)的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理。

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：

1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞

在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。

3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性

通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。

4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄

采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備

記錄方式可采用攝影照片、縮時(shí)電影、電視等多種手段。

5.研究的范圍比較廣泛

應(yīng)用的學(xué)科領(lǐng)域較為寬廣，如細(xì)胞學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、生物化學(xué)、遺傳學(xué)、分子生物學(xué)等；

適用的對(duì)象范圍廣，從低等動(dòng)物到高等動(dòng)物，一種動(dòng)物的不同年齡階段以及不同組織，都可進(jìn)行有針對(duì)性的研究。

6.研究的費(fèi)用相對(duì)較經(jīng)濟(jì)

可提供大量、同一時(shí)期、重復(fù)性好的、生物學(xué)性狀相似的實(shí)驗(yàn)對(duì)象。

50T 猴痘病毒PCR檢測(cè)試劑盒  低溫運(yùn)輸，-20℃保存 31.2-2000 pg/mL ELISA Kit for Human Neurofilament medium polypeptide

30µL 組蛋白3.1小鼠單抗 Histone 3.1 Mouse MAb -20℃保存 7.8-500 pg/mL 人血管緊張素Ⅱ1A型受體(Type-1A angiotensin II receptor)ELISA試劑盒

2 ug pBI 221-GFP pBI 221-GFP 低溫運(yùn)輸，-20℃保存 0.

真皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞2 ug pMIG-PP2A-Abeta pMIG-PP2A-Abeta 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

PYG液體培養(yǎng)基基礎(chǔ) PYG Broth Medium Base 250g

1KU 心肌黃 Diaphorase 4℃避光保存

100mL Methylene Blue Stain,100x Methylene Blue Stain,100x 常溫保存

CD57/HNK1  髓鞘相關(guān)糖蛋白CD57抗體 規(guī)格: 0.1ml

Phospho-Bcl-2(Ser70)  磷酸化Bcl-2抗體 規(guī)格: 0.1ml

乳糖蛋白胨半固體培養(yǎng)基 Lactose Peptone Semisolid Medium 250g

25 mg Fluorescein-5-maleimide Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存

SGTA  小谷三角四肽重復(fù)區(qū)蛋白α抗體 規(guī)格: 0.2ml

Phospho-Tuberin/TSC2 (Ser939)  磷酸化馬鈴薯球蛋白(結(jié)節(jié)性硬化)抗體 規(guī)格: 0.1mlEukaryotic aspartyl protease  天冬氨酸蛋白家族蛋白抗體 規(guī)格: 1ml

DRD2  多巴胺受體D2抗體 規(guī)格: 0.1ml

CD68  CD68抗體 規(guī)格: 0.1ml