產品屬性：

產品介紹：

名稱    大鼠角膜內皮細胞

2.組織來源：眼角膜組織

3.產品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

4.細胞簡介：

大鼠角膜內皮細胞分離自眼角膜組織；角膜位于眼球前壁的一層透明膜，約占纖維膜的前1/6，從后面看角膜呈正圓形，從前面看為橫橢圓形。角膜厚度各部分不盡相同，中央部最薄。角膜有十分敏感的神經末梢，如有外物接觸角膜，眼瞼便會不由自主地合上以保護眼睛。為了保持透明，角膜并沒有血管，透過外界空氣、淚液及房水獲取養(yǎng)份及氧氣。角膜分為五層，由前向后依次為：上皮細胞層、前彈力層、基質層、后彈力層、內皮細胞層。角膜的高度透明性和光學性是正常發(fā)揮生理功能的必要條件之一，而角膜內皮細胞（CEC）在維持角膜的正常生理功能方面起重要作用。角膜內皮細胞是角膜內層的單層細胞，構成了后彈力層和房水之間的物理屏障，通過離子“泵"功能調節(jié)角膜中離子濃度和水分，維持角膜的半脫水狀態(tài)，保證角膜的正常厚度和透明度。一旦角膜內皮細胞功能出現紊亂，常導致角膜水腫而使角膜部分甚至*失去透明性。角膜內皮細胞主要功能有：①角膜是的無血管的組織，具有透明的特性和合成許多蛋白的功能；②角膜內皮細胞對角膜透明性有重要作用；③角膜內皮細胞通過Na+-K+-ATP酶活性，維持角膜和房水內Na+梯度，防止水分滲入角膜內，維持角膜實質層相對脫水狀態(tài)，維持透明性。

5.方法簡介：

()實驗室分離的大鼠角膜內皮細胞采用混合膠原酶消化結合內皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質量檢測：

()實驗室分離的大鼠角膜內皮細胞經NSE（神經元特異性烯醇化酶）免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息：

包被條件PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

產品貨號CM-R169

換液頻率每2-3天換液一次

生長特性貼壁

細胞形態(tài)內皮細胞樣

傳代特性可傳2-3代

消化液0.25%

培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5%

處理方法：

收到細胞后，檢查外包裝是否完整，細胞培養(yǎng)瓶是否完好。如有破損漏液等問題，請即時聯系。并進行以下操作：

1. 75%酒精棉球擦拭T25細胞培養(yǎng)瓶外部。

2. 將細胞放入37度培養(yǎng)箱中預溫3-4小時后再做處理，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。

3. 預熱培養(yǎng)基（含10%胎牛血清，1%雙抗）。

4. 顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照保存（40×,100×,200×各一張）。

5. ①若細胞密度較小，無菌操作，去掉培養(yǎng)基。每瓶添加第四步中準備的5-6ml培養(yǎng)基。放到37度培養(yǎng)箱培養(yǎng)。待細胞密度達到80%以上，進行傳代。

實驗操作步驟：  

a．采用認可的方案處死嚙齒動物。

b．立即在無菌超凈臺內用70％乙醇擦洗整個動物。

c．用無菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用無菌鑷子將皮膚扯向后腿。

d．用另一無菌的剪刀和鑷子切開腹部，取出含有胚胎的子宮，置于無菌的培養(yǎng)皿上。

e．剔除胚胎周圍的包膜，將胚胎放于無菌的含有無菌PBS的100ml燒杯中。

f．漂洗胚胎，去掉PBS。繼續(xù)用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮為止。

注意事項：

1. 正式實驗前請選取幾個樣本做預實驗，以優(yōu)化實驗條件，取得最佳實驗效果。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內壁上的液體離心至管底，

避免開蓋時試劑損失。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。

4. 樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導致錯誤的結果。

5. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗

并*清除殘留清潔劑。

6. 實驗后完成后所有樣品及接觸過的器皿應按照規(guī)定程序處理。

100mL D-Hanks溶液 D-Hanks Solution 4℃保存 0.312-20 ng/mL 麻疹病毒(MV)核酸檢測試劑盒(RT-PCR法)

2 ug pBlueBacHis2 B pBlueBacHis2 B 低溫運輸，-20℃保存 0.312-20 ng/mL 人粘蛋白/粘液素5B(MUC5B)ELISA試劑盒

100mL DNTris HCl，1M，pH7.5   0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Myeloid cell nuclear diffe?嵌?L?

大鼠角膜內皮細胞BNIP3  促凋亡調節(jié)蛋白BNIP3抗體 規(guī)格: 0.1ml

phospho-GSK-3 Beta(Ser21)  磷酸化葡萄糖合成激3β抗體 GSK3α(Phospho-Ser21) 規(guī)格: 0.1ml

5g 萘啶酮酸 Nalidixic Acid 室溫干燥保存

250mL Phosphate Buffer，0.5M, pH9.5  Phosphate Buffer，0.5M, pH9.5  常溫保存

50次 柱式分枝桿菌DNAout Column Myco DNAOUT 常溫

1瓶 MuM-2B細胞株 MuM-2B 低溫運輸和保存

WEE1 protein  WEE1蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

1mL 溶液,50mg/mL Carbenicillin Disodium Salt -20℃避光保存

2 ug pET-45b(+) pET-45b(+) 低溫運輸，-20℃保存

阪崎腸桿菌分離瓊脂（ESIATM） Enterobacter Sakazakii Isolation Agar 250g

20 mg L-Canavanine（iNOS抑制劑） Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存

DHRS4  短鏈脫/還原家族4抗體 規(guī)格: 0.2ml

細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：

1.研究的對象是活細胞

在實驗過程中，根據要求可始終保持細胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態(tài)、結構、生命活動等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件，可以根據實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。

3.研究的樣本可以達到比較均一性

通過細胞培養(yǎng)一定代數后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞，需要時，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。

4.研究內容便于觀察、檢測和記錄

采用各種研究技術：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備

記錄方式可采用攝影照片、縮時電影、電視等多種手段。

5.研究的范圍比較廣泛

應用的學科領域較為寬廣，如細胞學、免疫學、腫瘤學、生物化學、遺傳學、分子生物學等；

適用的對象范圍廣，從低等動物到高等動物，一種動物的不同年齡階段以及不同組織，都可進行有針對性的研究。

6.研究的費用相對較經濟

可提供大量、同一時期、重復性好的、生物學性狀相似的實驗對象。